内蒙古绒山羊BMP-2基因DNA序列的克隆与荧光原位杂交定位

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本研究从内蒙古绒山羊血中提取基因组DNA,PCR扩增绒山羊的BMP-2基因片段,连接到pGM-T载体、转化,筛选鉴定阳性克隆提取质粒进行测序,和GenBank数据库进行比对,对它们的核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析,并将克隆所得质粒标记探针,利用FISH技术确定BMP-2在染色体上的位置。试验结果充实了BMP-2基因图谱,为进一步了解BMP-2基因信息对绒山羊的选育提供了理论支持。结果如下:1.克隆了内蒙古绒山羊BMP-2基因的外显子,外显子长1751bp。对绒山羊、绵羊、牛、猪、人和猴子的相应序列做同源性比较分析和进化树分析,所得结果与物种间的进化关系相符。2.绒山羊、绵羊和牛的BMP-2基因第三外显子的这部分序列,序列间的变异完全是碱基的替换。其中绒山羊和绵羊序列之间,发生了3个碱基替换,相似率高达99.6%,而牛与绒山羊碱基替换数目为13个,相似率为98.1%,比绒山羊与绵羊的相似率要低,比较绒山羊、绵羊和牛第三外显子的氨基酸序列,有5处不同,其中与绵羊只有1变异,牛有4处,同源性非常高,可见,绒山羊、绵羊和牛之间的碱基突变绝大多数为同义突变,说明BMP-2基因保守性很强。3.将克隆得到的绒山羊BMP-2基因片段质粒,根据试剂盒说明标记为探针,利用荧光原位杂交方法定位于染色体13q15。
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