海带(Saccharina japonica)褐藻胶合成途径若干基因的克隆、表达以及功能验证

被引量 : 0次 | 上传用户:ajdpwsy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
褐藻胶作为褐藻细胞壁的特征性组分,具有多种生物活性,广泛应用于食品、医药和纺织等多个行业。相对假单胞菌属和固氮菌属微生物而言,褐藻的褐藻胶生物合成途径尚不明确,研究其合成通路基因的结构与功能,不仅对于研究褐藻纲的系统进化具有重要的科学意义,同时也将为分子辅助育种、基因工程等研究提供必要的功能基因研究基础。本论文利用生物信息学方法,对“国际千种植物转录组计划”数据库和海带基因组数据库进行检索和注释,对褐藻胶生物胶合成途径的基因(PMI、PMM、MPG、algD和algG)进行了候选基因的同源性、结构域、三维结构等分析,初步完成了对其基因功能的预测,基本构建完成了海带等的褐藻胶生物合成途径;通过研究褐藻胶合成途径基因的拷贝数变化、多基因家族特殊的基因排布方式以及基因的系统进化关系等,探讨了藻类褐藻胶合成通路基因的进化起源和多基因家族的适应性变异和演化过程。结果显示:海带等褐藻的褐藻胶合成途径与微生物基本一致,但其第一步反应(可逆性催化甘露糖-6-磷酸和果糖-6-磷酸之间的相互转化)和第三步反应(可逆性催化甘露糖-1-磷酸和GDP-甘露糖之间的相互转化)的酶则由Type I类型双功能PMI基因(同时具有PMI和MPG活性)编码;褐藻胶合成通路中前体物质GDP-甘露糖醛酸合成基因的拷贝数较少(海带中PMI基因为3个拷贝、PMM基因为单拷贝、algD基因为5个拷贝),但是其异构化修饰基因(algG)拷贝数众多以超大基因家族形式存在(海带有78个成员),且海带基因组中多拷贝基因algG基因的数目明显多于长囊水云(海带中algG基因成员数是水云algG基因的约三倍)。本论文首次完成了海带褐藻胶生物合成途径中关键基因的克隆(Sja-PMM基因和Sja-algG基因),并对比研究了Sja-PMM和Sja-PMI4的酶学性质。原核表达后获得Sja-PMM重组蛋白,大小为48KDa,浓度为0.97mg/ml,酶活性检测显示其同时具有磷酸甘露糖变位酶(PMM)和磷酸葡萄糖变位酶(PGM)活性,是一个双功能的底物非特异性蛋白;该蛋白的PMM和PGM活性的最适宜温度分别为25℃和30℃,最适缓冲液pH分别为7.4和7.0,酸性环境抑制酶活性,而碱性环境(缓冲液pH大于9.0)中酶活性几乎完全丧失;Mg2+和Co2+可极其显著促进PMM活性和PGM活性,Zn2+抑制PMM活性,其他金属离子(Ca2+, Cu2+,Cd2+和Pb2+)则对两种活性均无显著影响;重组蛋白Sja-PMM的PMM活性显著高于其PGM活性,以甘露糖-1-磷酸作为底物,Vmax为58.82U/mg,Km为699.41μM,Kcat/Km为0.0672s-1μM-1,以葡萄糖-1-磷酸为底物,Vmax为6.45U/mg,Km为41.04μM,Kcat/Km为0.125s-1μM-1。酶学性质检测结果显示,Sja-PMI4重组蛋白属于Type I类型的双功能PMI蛋白,相比较其微弱的PMI活性,Sja-PMI4重组蛋白具有显著的MPG活性,其MPG活性最适反应温度和pH分别为40℃和7.0。不同金属离子对MPG活性的促进作用顺序为Mn2+> Mg2+> Ca2+> Cu2+,Zn2+显著性抑制MPG活性;酶促反应动力学参数分别为Vmax为3.28U/mg,Km为32.44mM,Kcat/Km为1.12s-1mM-1。对藻类褐藻胶途径同源基因的系统进化分析结果显示褐藻中的algD和algG基因可能起源于细菌的基因水平转移,而PMI和PMM基因可能起源于质体的二次内共生事件;海带和长囊水云中PMI基因都为3个拷贝,而Sja-PMI4功能验证结果显示,其MPG的功能可能源于基因复制后的新功能进化。褐藻胶合成的差向异构修饰基因(algG基因)在海带和长囊水云等褐藻基因组中存在多拷贝和基因串联重复现象,algG基因家族可根据系统进化结果大致分为五个类型,其形成可能源于基因复制事件,其多拷贝以及内含子分布的差异特征显示可能存在着不同的调控方式;algG基因催化甘露糖醛酸向古洛糖醛酸的变构,能够提高褐藻胶的强度进而影响到藻体的柔韧程度,与藻类对潮汐、海流等生态环境的适应密切相关,并可能与丝状体、叶状体等复杂体制的进化有关。
其他文献
随着中国人口老龄化的程度日益加深,老年人的比重逐渐增加,老年人的养老问题变的日趋严重,相比于城市老年养老问题的完善,农村老年人的养老问题不容忽视。农村经济基础差,养老保障
随着人们对优质蛋白的要求越来越高,鸭肉制品日益受到青睐。由于缺乏先进的技术指导,且受加工工艺的限制,我国鸭肉制品加工大多数仍停留在初级分割、手工作坊等阶段。产品保质期
高科技产业发展对经济增长的带动作用日益增强,大力发展高科技产业是我国实现新型工业化和经济可持续发展的重要战略。本文应用SFA方法,以新产品销售收入和专利申请数作为产
通过与玉米间作的夏红薯不同密度试验表明:夏红薯不同密度对红薯以及其间作的玉米的主要农艺和经济性状、产量及经济效益有较大影响;随着红薯密度增大,玉米的主要农艺和经济
潮湿结露现象是地下车库环境中的一个通病,严重影响着地下车库的使用性能和品质。本文以人生港湾·南欧城一期地下汽车库工程为例,分析地下车库产生潮湿结露现象的原因,并从
农业是我国国民经济的基础,处在农产品市场经济中的猪肉价格既是农业的基础也是国民经济运行的基础,猪肉产品价格的波动会通过农产品市场机制传输到农业生产和国民经济中去,
综合有关资料,分析了油菜主要气象灾害类型及其影响与发生规律,提出了防御技术对策。
当今社会,一个国家的经济要想进一步发展,从更长远说要想与国际接轨,必须持续实行利率市场化,这也是经济体制改革不可回避的问题.近年来,我国的利率市场化也在不断的推进和发
运用土壤普查资料,综合分析榆林市土壤资源的优势和不利因素,并根据其适宜性,对土壤资源进行评价与分类;按照评价的原则,对各类土壤资源的适宜性进行评述。针对土壤资源的特