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为了研究犬细小病毒基因疫苗，本研究根据已发表的犬细小病毒(CPV)VP2基因序列设计引物，用高保真PCR从CPV-YZ株中扩增出两个长约1.7kb的VP2基因片断(3′端有和无CpG基序)，将扩增片段克隆入pGEM-T载体，序列测定结果显示所获核苷酸序列与已发表的CPV VP2序列的同源性为99％。分别将两种基因片段克隆入真核表达质粒pcDNA3和pCEP4，构建成真核表达质粒pcDNA3-VP2、pcDNAC1-VP2、pCEP4-VP2和pCEPC1-VP2，用四种重组质粒注射BALB／c小鼠，经间接免疫荧光试验证明注射小鼠的血清中含有CPV特异抗体，血凝抑制试验结果显示，注射的四种重组质粒均能产生较高的抗CPV抗体，其中pcDNAC1-VP2产生的抗体水平最高。用上述四种重组质粒免疫毕格犬，血凝抑制试验结果表明，四种重组质粒均产生抗CPV特异抗体，对基因注射犬进行的攻毒保护试验结果显示，pcDNA3-VP2和pcDNAC1-VP2免疫组的存活率分别为25％(1／4)和50％4(2／4)，而pCEP4-VP2和pCEPC1-VP2免疫组无犬存活。 在上述试验的基础上，根据限制酶切图谱分析结果，用限制酶消化法切除了真核表达质粒pcDNA3中的neo基因。根据Kan~r基因序列设计引物，用高保真PCR从pET-30a质粒中扩增出Kan~r基因及调控区，并用其取代pcDNA3中的Amp~r基因，获得的改造质粒命名为pcDNAK。再根据CPV VP2基因序列设计引物，并在下游引物的3′-端引入6拷贝的犬源CpG序列，用高保真PCR从CPV-YZ株中扩增出约1.7Kb的VP2基因，将其克隆入pGEM-T载体，序列测定结果显示获得的VP2基因及CpG序列正确。将其克隆入pcDNAK质粒，将获得的基因免疫载体命名为pcDNAKC2-VP2。分别用pcDNAC1-VP2和pcDNAKC2-VP2免疫毕格犬，经血凝抑制试验证明，pcDNAKC2-VP2免疫犬的血凝抑制效价高于pcDNAC1-VP2，提示可用于犬细小病毒基因疫苗的进一步研究。