杨树是我国重要的树种之一,它生长速度快,易繁殖,在木材工业、纸浆业和绿化带建设中广泛应用,是人工林和大面积速生商品林建设的首选树种。 以欧美杨107离体叶片为材料,进行叶片直接再生不定芽实验,建立欧美杨107稳定高效的叶片再生体系,确立了适宜的叶片直接再生不定芽培养基和生根培养基。通过农杆菌介导首次将CMO基因转入欧美杨107,获得了耐盐性显著提高的转基因植株。 研究结果表明,附加BA0.8mg/L,IAA0.05mg/L的MS培养基可以高频诱导不定芽的产生。待小芽长至2-3cm时,转移到生根培养基(MS+NAA0.3mg/L)上,10d后生根,继续培养得到完整的植株。 本研究还分别进行了抑菌性抗生素头孢霉素(Cef)和选择性抗生素卡那霉素(Km)与潮霉素(Hyg)的敏感性试验,结果表明Cef250mg/L即能有效抑制农杆菌过度繁殖,叶片外植体分化未受到明显的抑制。Km15mg/L,Hyg5mg/L可作为诱导叶片芽分化的临界筛选浓度;Km20mg/L可作为生根时筛选抗性植株的浓度。 在农杆菌工程菌液中添加200μmol/L的乙酰丁香酮(As)可以显著提高抗性芽诱导率。 将CMO基因导入欧美杨107,经不定芽诱导及生根阶段的卡那霉素连续筛选,获得了6株抗性材料,对它们做PCR及Southem杂交检测,有1株呈阳性,证明CMO基因成功整合到欧美杨107基因组中。 转基因植株在经过5天0.5%NaCl胁迫后,相对电导率为17.2%,而未转基因植株为26.4%,表明转基因植株在盐胁迫下受到的伤害较未转基因的轻,并且转基因植株在0.4%-0.8%NaCl的生根培养基中的生根率及生长状态均好于未转基因植株。