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目的：寻找人骨髓间充质干细胞快速扩增、纯化培养的最佳方法，建立快速扩增培养体系；建立合适的诱导体系，探讨将扩增后的hBMMNCs向肝细胞方向诱导分化的可能性，并验证该诱导体系的诱导效率；探索在中空纤维滤器内扩增人骨髓间充质干细胞并诱导其向肝细胞样细胞分化构建生物人工肝反应器的可行性。
方法：获取志愿者骨髓，经密度梯度离心分离人骨髓单个核细胞(hBMMNCs)，采用含EGF和PDGF—BB的培养液，比较直接培养与磁分选后培养结果，比较不同的传代浓度对细胞增殖的影响；并采用流式细胞分析方法鉴定扩增后细胞的表型特征；分离hBMMNCs，采用含EGF和PDGF—BB的培养液，直接种植培养，以2.5×103/cm2浓度传代，扩增至1010数量级细胞后，以含HGF、FGF—4、OSM各20ng/mL的培养液进行诱导培养，以RT—PCR、ELISA、流式细胞分析、ELISA等方法检测其白蛋白、CK18及甲胎蛋白合成能力及安定代谢能力，以生化检测测定其氨代谢及尿素合成功能情况；采用直接hBMMNC种植培养，以2.5×103/cm2浓度传代，采用含EGF和PDGF-BB的培养液，在培养瓶内部分扩增后，种植入中空纤维滤器内继续扩增一阶段后，改用含HGF、FGF-4、OSM各20ng/mL的培养液进行诱导培养，检测诱导后白蛋白、甲胎蛋白的合成、氨和安定的代谢、尿素合成功能情况。
结果：1.磁分选技术对细胞纯化无明显帮助，且降低细胞的增殖能力；2.细胞传代浓度为2.5×103/cm2时细胞扩增速度最快；3.经多次传代扩增后细胞表型特征仍符合骨髓间充质干细胞特征；4.经模拟生物人工肝治疗后，血液中的氨和安定浓度明显降低；5.治疗早期胆红素水平有所下降，但随后总胆红素维持不变，直接胆红素有所上升；6.生物反应器虽然在治疗能检测出白蛋白合成能力，但在治疗过程中未明显改善血液中低蛋白状态；7.治疗对凝血功能改善也不明显。
结论：采用直接hBMMNCs种植培养，以2.5×103/cm2浓度传代，采用含EGF和PDGF—BB的培养液，可快速将细胞数量扩增至1010数量级细胞，扩增后细胞具有典型人骨髓间充质干细胞表型特征；以含HGF、FGF—4、OSM各20ng/mL的诱导培养体系，能成功地诱导经大量扩增后的骨髓间充质干细胞向肝细胞方向转化；构建的生物反应器在体外模拟生物人工肝治疗中具有较明显的解毒等代谢支持能力，但合成能力尚需进一步实验验证。