Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞株SaOS-2 ezrin表达及生物学行为的影响

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目的 应用特异性siRNA(小干涉RNA)抑制人骨肉瘤细胞ezrin基因表达,观察其对SAOS-2细胞生物学特性的影响。方法 设计并化学合成2条针对ezrin基因的21nt siRNA,以150nM转染SaOS-2细胞,应用实时定量PCR检测ezrin mRNA表达,筛选出抑制效率最高的siRNA;再分别以不同浓度的siRNA转染入骨肉瘤细胞,应用实时定量PCR检测ezrin mRNA表达;再以这条siRNA及其最佳抑制浓度转染细胞,抽提孵育24、48、72、96h细胞总RNA及蛋白质,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测ezrin mRNA及蛋白质表达情况。应用MTT法检测siRNA干扰后骨肉瘤细胞的增殖能力,以Millicell PCF侵袭小室研究细胞体外侵袭、运动性变化,并检测细胞异质粘附的改变情况。结果siRNA抑制效率在9.375~150nM范围内呈浓度依赖性增高,以siRNA-1 150nM最显著;转染siRNA-1的SaOS-2细胞24、48、72、96h ezrin mRNA和蛋白质下调,分别以48h、72h最显著。siRNA干扰对细胞增殖和侵袭能力无影响,但能抑制细胞粘附和运动能力。结论特异性siRNA可以抑制ezrin基因的表达,抑制细胞粘附和运动,从而抑制骨肉瘤转移。
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