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目的:观察中药复方肠胃清对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,并从趋化因子受体4(Chemokine Receptor4,CXCR4)/趋化因子12(Chemokine Ligand12,CXCL12)信号转导通路及基质金属蛋白酶9(Matrix Metalloproteinase9,MMP9)的表达探讨肠胃清抑制结肠癌肝转移的作用机制。
方法：采用原位瘤块接种法建立小鼠结肠癌细胞CT26肝转移模型,实验共分为四组,即假手术组、模型组、肠胃清低剂量组、肠胃清高剂量组,假手术组仅行开腹手术。造模后第四天开始进行干预,假手术组和模型组均给予生理盐水,肠胃清低、高剂量组给药量分别为10.37g/kg/d、20.74g/kg/d。每天灌胃1次,每次1毫升,连续14天。造模四周后脱颈处死小鼠,剖腹观察并取材,假手术组取正常结肠组织,模型组、肠胃清低、高剂量组取结肠癌原位瘤组织和肝转移瘤组织,测量并称重小鼠结肠癌原位瘤的大小和重量,采用HE染色法判断肝转移:采用免疫组织化学和实时荧光定量PCR实验方法检测CXCR4、CXCL12和MMP9在正常结肠组织及结肠癌原位瘤组织中的表达。
结果：肠胃清低、高剂量组小鼠结肠癌原位瘤的重量抑制率分别为24.73％、45.91％;体积抑制率分别为27.93％、63.48％。模型组、肠胃清低、高剂量组小鼠结肠癌原位瘤重量分别为2.00±0.52、1.51±0.27、1.08±0.37,肠胃清低、高剂量组与模型组比较,P＜0.05,肠胃清高剂量组与肠胃清低剂量组比较,P＜0.05,呈剂量依赖性;模型组、肠胃清低、高剂量组小鼠结肠癌原位瘤体积分别为3.38±1.96、2.43±1.62、1.23±0.69,肠胃清低剂量组与模型组比较,有下降趋势,但无统计学差异(P＞0.05),肠胃清高剂量组与模型组比较,P＜0.05。模型组与肠胃清低、高剂量组肝转移率分别为75％、37.5％、12.5％,肠胃清低剂量组与模型组比较,有下降趋势,但无统计学差异(P＞0.05);肠胃清高剂量组与模型组比较,具有统计学差异(P＜0.05)。免疫组化结果显示:模型组、肠胃清低、高剂量组结肠癌原位瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP9的蛋白表达均高于假手术组正常结肠上的表达。模型组结肠癌组织中CXCR4、CXCL12、MMP9的蛋白表达显著高于假手术组,P＜0.01,同时肠胃清低剂量组和高剂量组可以降低其表达,其中,CXCR4、CXCL12的蛋白表达肠胃清低剂量组和高剂量组与模型组比较,P＜0.05,具有统计学差异,肠胃清高剂量组与肠胃清低剂量组比较,P＜0.01,呈剂量依赖关系;MMP9的蛋白表达肠胃清低剂量组与模型组比较,P＞0.05,差异不明显,肠胃清高剂量组与模型组比较,P＜0.01,肠胃清高剂量组与肠胃清低剂量组比较,P＜0.01,呈剂量依赖关系。实时荧光定量PCR结果显示:模型组、肠胃清低、高剂量组结肠癌原位瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP9的mRNA表达均高于假手术组正常结肠上的表达。模型组结肠癌组织中CXCR4、CXCL12、MMP9的mRNA表达显著高于假手术组,P＜0.05,同时肠胃清低剂量组和高剂量组可以降低其表达,其中,CXCR4的mRNA表达肠胃清低剂量组和高剂量组与模型组比较,P＜0.01,均具有统计学差异;CXCL12、MMP9的mRNA表达肠胃清低剂量组与模型组比较,P＞0.05,差异不明显,肠胃清高剂量组与模型组比较,P＜0.05,具有统计学差异。
结论：肠胃清抑制小鼠结肠癌原位瘤的生长,可降低小鼠结肠癌肝转移的发生率,并呈剂量依赖关系;肠胃清能减少小鼠结肠癌原位瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP9的表达;并可能通过调节趋化因子CXCR4/CXCL12信号转导通路降低MMP9的表达抑制结肠癌肝转移,为中医药抗癌转移靶向治疗提供新的实验依据。