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实验目的:探讨健脾益气补髓法(芪参地黄颗粒)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠B细胞介导的免疫机制。实验方法:1.随机选8只Lewis雌性大鼠作为佐剂对照组(CFA组),其余大鼠通过Rα97-116肽段进行免疫,将成功构建的40只实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠随机分为模型组(Model组)、芪参地黄颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组(QSDH-L,QSDH-M,QSDH-H组)和阳性药组(Prednisone组),每组各8只。观察大鼠体重和临床症状变化,ELISA检测ACh R-Ab含量评价健脾益气补髓法对实验性自身免疫性重症肌无力动物模型大鼠症状及抗体的影响.2.通过Western blot检测大鼠脾脏组织CD19和CD27的蛋白表达,Btk、Lyn、Syk、Plc-γ2、p-Btk、p-Lyn、p-Syk和p-Plc-γ2蛋白表达的改变。3.免疫组化检测大鼠脾脏组织和胸腺组织CD19、CXCL13、B220和CD44的表达情况。4.采用RT-PCR的方法检测大鼠脾脏组织BAFF、CXCL13和CXCR5 m RNA的基因表达。实验结果:1.给药治疗前,与佐剂对照组比较,EAMG组体重减轻(P<0.001),临床症状加重(P<0.001),ACh R-Ab含量升高(P<0.001),具有显著性差异。2.给药治疗后,与模型组比较,芪参地黄颗粒低、中、高剂量组体重增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001),临床症状减轻(P<0.01,P<0.001),ACh R-Ab含量降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),具有显著性差异。3.Western blot结果显示,与佐剂对照组比较,模型组CD19和CD27蛋白表达升高(P<0.001),Btk、Syk、Plc-γ2蛋白表达均升高(P<0.01,P<0.001),Lyn蛋白表达降低(P<0.01),与模型组比较,芪参地黄颗粒低、中、高剂量组和阳性药组CD19蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001),CD27蛋白表达降低(P<0.01,P<0.001),Btk、Syk、Plc-γ2蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),Lyn蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),Syk和Plc-γ2磷酸化表达均降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),Lyn磷酸化表达升高(P<0.05,P<0.01),具有显著性差异,各组间Btk的磷酸化表达没有显著差异。4.免疫组化结果显示,在大鼠脾脏组织和胸腺组织中,与佐剂对照组比较,模型组CD19、CXCL13、B220和CD44的表达均升高,与模型组比较,芪参地黄颗粒低、中、高剂量组CD19、CXCL13、B220和CD44的表达都有所减少,其中在脾脏组织中,CD19芪参地黄颗粒高剂量组、CXCL13芪参地黄颗粒高剂量组、B220芪参地黄颗粒高剂量组和CD44芪参地黄颗粒中、高剂量组表达下调最为明显,接近阳性药组;在胸腺组织中,CD19芪参地黄颗粒中、高剂量组、CXCL13芪参地黄颗粒高剂量组、B220芪参地黄颗粒中、高剂量组和CD44芪参地黄颗粒中、高剂量组表达下调最为明显,接近阳性药组。5.RT-PCR结果显示,与佐剂对照组比较,模型组BAFF、CXCL13和CXCR5m RNA的基因表达水平升高(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,BAFF芪参地黄颗粒中、高剂量组和阳性药组m RNA的基因表达水平降低(P<0.05,P<0.01);CXCL13和CXCR5芪参地黄颗粒高剂量组和阳性药组m RNA的基因表达水平降低(P<0.05),具有统计学差异。结论:1.采用Rα97-116肽段造模方法,可以成功构建EAMG大鼠模型,此造模方法对于EAMG研究的模型构建,提供一定保障。2.健脾益气补髓法(芪参地黄颗粒)可以增加EAMG大鼠体重,有效改善临床症状,降低血清中ACh R-Ab含量,具有治疗MG的作用。3.健脾益气补髓法(芪参地黄颗粒)通过调控Btk、Syk、Plc-γ2和Lyn蛋白表达及Syk、Plc-γ2和Lyn磷酸化表达,降低BCR信号的传导,抑制B细胞活化机制,调节免疫系统。4.健脾益气补髓法(芪参地黄颗粒)通过降低EAMG大鼠CD19、CD27、B220、CD44、BAFF、CXCL13和CXCR5的表达,减弱对B细胞的激活作用,减少B细胞的分化增值,抑制B细胞产生ACh R-Ab,减少对AChR和NMJ的破坏,纠正免疫应答,对MG发挥治疗作用。