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猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-CoV）作为一种新发现的冠状病毒,属于冠状病毒科Alpha冠状病毒属,是有囊膜包被的单股正链RNA病毒,自2017年首次在中国猪场发现和报道以来,已经在广东清远地区猪场引发了严重的仔猪腹泻疫情。本研究对收集自广东地区45个猪场的236份腹泻病料进行回顾性检测,以确定SADS-CoV的最早出现时间及分布情况。结果表明,SADS-CoV至少在2016年7月前就已经在猪场出现,目前广东地区11个猪场检出为SADS阳性。腹泻病原的混合感染调查结果显示SADS-CoV的阳性检出率为43.5%,仅次于PEDV的阳性检出率（78.2%）,而SADS-CoV-PEDV混合感染的类型也最为普遍。对SADS-CoV阳性猪场腹泻病料进行测序分析,共获得两条SADS-CoV全基因组序列、五条N基因序列和五条S基因序列,序列比对显示所得五个阳性猪场的序列相似性高达99%-100%,系统遗传进化分析表明研究中所获得的所有SADS-CoV序列与先前报道的SADS-CoV毒株序列处在同一AlphaCoVs分枝并且与蝙蝠冠状病毒HKU2毒株有着最接近的亲源关系。与此同时,本研究建立了一种针对SADS-CoV的快速可靠的鉴定和定量的诊断方法。依据SADS-CoV N基因保守区域设计并合成了特异性的引物和荧光探针,建立了一种TaqMan探针法实时荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示,此方法中的引物和探针与其他十几种猪病原不发生交叉反应,特异性良好;检测灵敏度是普通RT-PCR的10倍,174份临床样品中,探针法SADS-CoV阳性检出率为70.69%,普通RT-PCR检出率为51.15%。这些数据证明了SADS-CoV TaqMan探针法具有高度的灵敏性（检出下限为1×101 copies/μL）、特异性和可重复性（变异系数<2%）,是一种适用于临床SADS-CoV快速检测和准确定量的方法。本研究以四个SADS-CoV阳性猪场的仔猪肠道研磨物悬液为材料进行病毒分离鉴定。在添加8μg/mL胰酶的条件下,SADS-CoV能在Vero细胞中稳定增殖并出现明显病变,从而成功分离出4株SADS-CoV病毒株（SADS-CoV-CN/GDDCD/2017、SADS-CoV-CN/GDWT/2017、SADS-CoV-CN/GDDE/2017以及SADS-CoV-CN/GDST/2017）。对4株SADS-CoV病毒株进行全基因组序列测定,序列比对结果表明,从细胞分离出的SADS-CoV毒株彼此间以及与已有的SADS-CoV毒株相比相似性在99%以上。在电镜下可以观察到明显的冠状病毒粒子,用间接免疫荧光方法检测,可以看到胞浆部位有特异性荧光,以上结果证明成功分离到4株SADS-CoV病毒株。为了确定SADS-CoV分离株对仔猪具有致病性,用第9代WT分离株(TCID50为106.625/mL)对3天龄无腹泻病原感染的仔猪进行动物回归试验,攻毒组和对照组各6头,分别口服6 mL病毒液和DMEM,攻毒后每天记录临床症状并检测腹泻病原。结果显示,攻毒后48 h,攻毒组全部水样腹泻,体重下降,腹泻病原检测只有攻毒组呈SADS-CoV阳性。到攻毒后第4 d,攻毒组仔猪3/6死亡,而对照组仔猪表现正常。在攻毒后第2d、3 d、4 d剖检仔猪,可观察到攻毒组仔猪肠道变得薄而透明,肠腔充满黄色水样,对照组无明显症状。各组织器官带毒量检测结果显示,SADS-CoV具有小肠嗜性,在小肠部位（空肠、回肠、十二指肠,肠系膜）带毒量相对较高。动物回归试验证明SADS-CoV分离病毒株能引起仔猪腹泻等临床症状,具有致病性。