目的:建立体内、体外对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)诱导药物性肝损伤模型探讨SIRT1在APAP诱发的肝损伤中的作用,并对相关机制做初步探讨。方法:(1)在体外培养的LO2细胞和Hep G2细胞中,改变APAP的作用浓度和作用时间,Western Blot和Real-Time PCR检测APAP刺激对SIRT1表达水平的影响;(2)通过转染干涉SIRT1质粒来改变LO2细胞中SIRT1的表达,Western Blot检测APAP刺激对SIRT1和Cleaved caspase 3表达水平的影响,Real-Time PCR检测Cat、Sod2和Gpx-1相关抗氧化基因表达水平,采用MTT法检测LO2细胞存活率,检测LO2细胞中MDA和GSH含量;(3)将6-8周龄C57BL/6J健康雄性小鼠随机分为五组:APAP 0 h组、APAP3 h组、APAP 6 h组、APAP 12 h组、APAP 24 h组,Western Blot、Real-Time PCR和IHC检测APAP处理不同时间点下小鼠肝脏组织中SIRT1的表达水平变化,检测血清中AST水平变化;(4)将6-8周龄C57BL/6J健康雄性小鼠单次尾静脉注射慢病毒介导的SIRT1-1和SIRT1-2,特异性的降低小鼠肝脏中SIRT1的表达,检测小鼠血清中AST水平变化,测定小鼠肝脏组织中MDA和GSH含量变化,Western Blot检测核Nrf2表达水平,Real-Time PCR检测肝脏Nrf2及其下游抗氧化靶基因Sod2、Gpx-1、GCLC和G6pdh m RNA表达的影响,对小鼠肝脏组织进行病理组织切片和HE染色,观察SIRT1表达降低对小鼠肝脏的损伤程度,对小鼠肝脏组织进行TUNEL染色,研究SIRT1表达降低对小鼠肝脏组织中凋亡细胞的表达情况;(5)6-8周龄C57BL/6J健康雄性小鼠随机分为四组:Vehicle组、APAP组、SRT1720组和APAP+SRT1720组,检测小鼠血清中AST水平变化,测定小鼠肝脏组织中MDA和GSH含量变化,Western Blot检测核Nrf2表达水平,Real-Time PCR检测肝脏Nrf2及其下游抗氧化靶基因Sod2、Gpx-1、GCLC和G6pdh m RNA表达的影响,对小鼠肝脏组织进行病理组织切片和HE染色,观察SIRT1表达上调对小鼠肝脏的损伤程度,对小鼠肝脏组织进行TUNEL染色,研究SIRT1表达上调对小鼠肝脏组织中凋亡细胞的表达情况。结果:(1)在LO2细胞和Hep G2细胞中,随着APAP作用浓度的增加和作用时间的延长SIRT1的蛋白表达逐渐升高;(2)在LO2细胞中,慢病毒介导的SIRT1基因敲降会增加Cleaved caspase 3蛋白的表达,同时能明显加重LO2细胞中对APAP诱发的细胞抗氧化防御;(3)慢病毒介导的SIRT1基因敲降加剧APAP诱发小鼠肝损伤,核Nrf2蛋白表达下调,Nrf2及其下游相关抗氧化基因m RNA表达明显下调;(4)SIRT1激活剂SRT1720对对乙酰氨基酚诱发的急性肝损伤有较强的抗氧化作用和保护作用。结论:SIRT1对对乙酰氨基酚诱导的肝损伤具有良好的保护作用,其机制可能与调节Nrf2信号通路,发挥抗氧防御能力,从而减轻对乙酰氨基酚诱导的肝损伤。