IL-6、IL-8与羊水栓塞关系的实验研究

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目的:通过建立羊水栓塞动物模型,分析外周血液动力学改变、测定血中IL-6、IL-8含量的变化,进一步探索羊水栓塞的发病机制。方法:1.构建羊水栓塞的大鼠模型正常怀孕大鼠30只,重300g~500g,胎龄20~25d。随机分为3组:对照组(生理盐水组)、实验组1(羊水原液组)、实验组2(羊水胎粪液组),每组为10只。待麻醉生效后,大鼠行子宫次全切除术后,关腹。分离孕鼠左颈总动脉,从左颈总动脉插管,并将其接通三通管连接于二通道生理记录仪上,测出连续的血液动力学指标。三组经腹腔静脉分别注入生理盐水、羊水原液、羊水胎粪混合离心上清液,分别于注射前、注射后60min由左颈总动脉取血,量1ml(若在观察过程中大鼠出现死亡立即取血),将血液离心10min(3000r/min),取其上清液放置于-20°C恒温冰箱中保存备用,剪开胸腔,取孕鼠右肺组织留做病理学检查。2.羊水胎粪上清液的制备打开胎鼠腹壁,取出胎鼠大肠,用注射器抽取羊水冲洗胎鼠肠腔(或将胎粪轻轻挤压出来),用匀浆器磨碎,配置成羊水中混有1%~7%胎粪的羊水胎粪混合悬液,然后离心10min (3000r/min),留取上清液。3.IL-6的检测方法IL-6的检测方法:用酶联免疫吸附实验(ELISA)对IL-6进行检测。将已知IL-6浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-6和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用,产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-6的浓度呈比例关系。4.IL-8的检测方法IL-8的检测方法:用酶联免疫吸附实验(ELISA)对IL-8进行检。将已知IL-8浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-8和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-8的浓度呈比例关系。所有数据使用SPSS18.0处理,组内采用t检验,组间比较用多个样本均数间的两两比较。P<0.05有统计学意义。结果:1.大鼠羊水栓塞模型建立成功,实验组1、实验组2孕鼠临床表现比较严重,实验组1孕鼠60min内无死亡,实验组2孕鼠60min内1只死亡。三组孕鼠外周血液动力学结果:对照组血液动力学指标有一过性改变,无统计学意义(P>0.05),实验组1、实验组2与对照组动脉收缩压、舒张压及平均动脉压相比有明显下降(P<0.05),以注入羊水后10min最为明显,30min至60min维持低水平,未恢复正常,实验组2中有一只孕鼠出现平均动脉血压持续性下降约至20mmHg发展成心衰,实验组1与实验组2之间差异不明显,无统计学意义(P>0.05),三组孕鼠心率改变差异无统计学意义(P>0.05)。2.IL-6浓度:对照组注射前(20.38±7.73)μg/ml,注射后(19.47±6.46)μg/ml;实验组1注射前(21.41±6.47)μg/ml,注射后(30.74±5.61)μg/ml;实验组2注射前(20.27±5.51)μg/ml,注射后(36.44±5.47)μg/ml。3.IL-8浓度:对照组注射前(15.78±4.36)μg/ml,注射后(15.29±4.76)μg/ml;实验组1注射前(16.21±3.89)μg/ml,注射后(23.02±8.06)μg/ml;实验组2注射前(15.49±4.25)μg/ml,注射后(38.8±9.02)μg/ml。4. HE染色显示实验组1与实验组2可见不同程度的肺水肿,大量的炎性细胞浸润,肺血管内见鳞状上皮、粘液等羊水成分,对照组无明显改变。5. CK10免疫组织化学染色检测可见实验组1与实验组2在大鼠肺血管含有鳞状上皮等羊水有形成分,对照组无明显改变。6. APM染色可见实验组1与实验组2肺血管里角化鳞状上皮呈桃红色、管腔中粘液呈蓝色、中性粒细胞胞质淡蓝或无色核红色,对照组无明显改变。结论:1.孕鼠临床表现的严重程度与进入母体的羊水成分有关,出现胎粪污染时要警惕AFE。2.实验组IL-6含量增加,以羊水胎粪组增加更为明显,说明胎粪里含有的某些物质刺激机体引起IL-6大量激活。3.实验组IL-8含量增加,以羊水胎粪组增加更为明显,说明胎粪里含有的某些物质刺激机体引起IL-8大量激活。
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