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研究表明肿瘤的组织学类型，肿瘤的部位，环境暴露，饮食因素，遗传基因，Helicobacter pylori感染状态，早期肿瘤的处理等都是胃癌病人临床结局的重要因素。尽管诊断和治疗技术先进，胃癌发病率及死亡率仍不乐观。胃癌的危险因素包括遗传易感基因、HP感染、不良饮食习惯及生活方式、职业因素等，这些都可能导致胃癌的发生、进展及预后不良。 机体内存在氧化损伤与修复的动态平衡，一旦平衡被打破，癌症就有可能发生。DNA氧化损伤导致转录或复制缺陷、突变、基因不稳定最终出现细胞功能障碍。因此，DNA修复能力在维持正常细胞功能方面起核心作用。DNA的修复主要通过核苷酸切除修复(Nucleotide excision repair，NER)、碱基切除修复(BER)和错配修复(MMR)等通路完成。其中核苷酸切除修复(NER)是机体正常细胞针对DNA加合物、紫外线导致的嘧啶二聚体等DNA链上较大损伤的修复过程。它由多种DNA修复酶组成，包括ERCC1，XPD(ERCC2)，XPF(ERCC4)，XPG(ERCC5)，XPC，ERCC6(CSB，RAD26)等。NER能修复任何使DNA螺旋不稳定的损伤，因此NER通路在肿瘤形成早期起至关重要的作用。 NER通路中的基因变异与多种肿瘤的关系已被广泛研究。NER核心基因的SNPs可能导致个体之间的DNA修复能力不同，因此导致肿瘤的易感性以及对肿瘤治疗药物的反应以及药物毒性的作用不同。ERCC5(Excision repair crosscomplementation group5)是NER修复途径的关键因子之一，其基因定位于染色体13q33，其编码蛋白XPG(xeroderma pigmentosum pomplementary group G)是一种结构特异性核酸酶，在哺乳动物核酸切除修复中负责3端的内切，另外也参与XPF/ERC1复合物介导的5端的的内切。以往研究显示ERCC5基因启动子多态或XPG的mRNA表达水平改变与多种癌症类型的发病风险增高有关。如，ERCC5rs751402多态与涎腺肿瘤发病有关，rs751402多态与口腔鳞状细胞癌有关，rs2296147 C变异型在前列腺癌中呈低风险。另有研究报道，ERCC5 rs751402多态与铂类为基础的非小细胞肺癌化疗敏感性有关。我们前期研究发现ERCC5rs751402(AA型及AG+AA型)和rs2296147(CC型)增加胃癌的发病风险，但是rs751402和rs2296147是否影响胃癌的进展及预后尚无报道。越来越多的证据表明启动子区及5非翻译区的多态与基因转录调控密切相关，可能影响基因的转录及基因功能。Crawford等研究发现ERCC5启动子区与基因转录调控密切相关，提示此区域的SNP位点可能影响基因的转录及基因功能。位于基因启动子区域的SNP位点也属于rSNP，可能导致基因转录活性的上升或下降，造成其编码蛋白的表达量上升或下降，进一步影响其生物学活性。ERCC5 rs751402和rs2296147位于ERCC5基因5非翻译区，是否影响基因的表达尚无报道。 综上，本研究拟探讨ERCC5基因启动子区rs751402、rs2296147单核苷酸多态与胃癌发生、进展及预后的关系，探讨XPG蛋白表达与不同胃疾病临床病理参数及胃癌预后的关系，并进一步探讨ERCC5启动子区多态对XPG蛋白表达的影响及其分子机制。 方法: 1、利用SequenomMassARRAY高通量技术平台(Sequenom Inc.，San Diego，CA)及RFLP-PCR技术，对辽宁地区898例胃癌患者，851例萎缩性胃炎和937例轻度浅表性胃炎病例进行ERCC5基因启动子区rs751402、rs2296147多态位点的基因分型检测。利用SPSS16.0软件进行统计分析。多元logistic回归法用于多态与胃癌发病风险的相关性分析。X2或Fishers确切概率检验法用于临床病理参数与多态型的关系分析。生存分析采用log-rank检验进行单因素分析，用Cox回归进行多因素分析。p＜0.05表示有统计学意义。 2、应用免疫组化方法检测不同胃疾病组织中XPG蛋白表达水平，采用电话随访收集胃癌病人生存信息，采用病例查询法记录病例临床病理参数、吸烟及饮酒资料，非参数检验分析XPG蛋白在不同疾病组间的表达差异。X2检验或Fishers确切概率法用于临床病理参数与XPG蛋白表达的关系分析。单因素及多因素生存分析用于表达与预后关系分析。 3、以X2检验进行不同疾病组间性别、吸烟、饮酒状态等差异性比较，方差分析或独立样本t检验法进行各疾病组间年龄差异性比较。采用Mann-Whitney U检验比较不同多态型之间XPG蛋白表达的差异。 4、构建PGL3-basic-rs751402 G/A-rs2296147 T/C四条重组质粒，检测启动子荧光报告基因质粒，比较不同等位基因型启动子活性。 结果: 1、胃癌组与轻度浅表性胃炎组比较，ERCC5 rs751402多态显性模型AA+AG基因型较野生型GG型提高胃癌的发病风险达1.23倍(95％CI=1.0-1.5)。与AG+GG型相比，携带AA型个体能提高从萎缩性胃炎到弥漫型胃癌的发病风险达1.51倍(P=0.022，95％CI=1.06-2.14)，AA型同样能提高从非癌到弥漫型胃癌的发病风险达1.42倍(P=0.027，95％CI=1.04-1.93)。ERCC52296147在各种疾病组之间基因型分布频率未见明显统计学差异。ERCC5 rs2296147与CT+TT型相比，CC变异基因型提高从非胃癌组到弥漫型胃癌组的发病风险达1.57倍(P=0.043，95％CI=1.01-2.44)。 2、ERCC5 rs751402和rs2296147多态与临床病理参数均无明显相关性。 3、单因素分析提示rs751402、rs2296147两个多态均与胃癌预后无明显相关性。多因素COX回归分析，结果发现携带rs751402 AA型个体，与GG型相比生存期明显缩短(P=0.041，HR=1.961，95％CI1.027-3.744)，隐性模型AA型比GG+AG型生存期明显缩短(P=0.040，HR=1.849，95％CI1.029-3.321)。ERCC5rs751402 AA型为胃癌患者预后不良危险因素。无论单因素分析还是多因素COX回归分析rs2296147多态均与预后无明显相关性。 4、XPG蛋白主要呈核染色。萎缩性胃炎及胃癌组XPG表达水平均明显高于浅表性胃炎组;胃癌组织中XPG表达水平明显高于癌旁组织;肠型胃癌患者XPG表达水平高于弥漫型胃癌。 5、多因素Cox回归模型结果提示XPG蛋白表达水平是一项独立的预后因素，XPG表达阳性患者生存期长。进一步分层分析发现，在年龄小于60岁的患者中，无论单因素分析(P=0.021)还是多因素分析(P=0.027)，XPG阳性表达均为保护性因素(分别为HR=0.373，95％CI0.154-0.901;HR=0.361，95％CI0.147-0.888)。另外，多因素分析发现男性患者XPG阳性表达也是保护性因素(P=0.002，HR=0.209,95％CI0.077-0.571)。 6、在总人群中ERCC5 rs751402多态与XPG蛋白表达显著相关，携带AA型个体，与GG型相比XPG蛋白表达显著下降(p=0.003)。rs2296147多态与XPG蛋白表达无相关性。进一步分层分析不同胃疾病状态下，胃癌组织中rs751402多态位点与XPG蛋白表达显著相关，携带AA型个体，与GG型相比XPG蛋白表达显著降低(p=0.006)，而且AA型与GG+GA型相比表达也显著降低(p=0.008)。萎缩性胃炎中携带AA型个体与GG+GA型相比，XPG蛋白表达也显著降低(p=0.044)。浅表性胃炎与癌旁组织中rs751402+8多态位点与XPG蛋白表达无关。不同疾病中rs2296147+185多态位点与XPG蛋白表达无相关性。 7、PGL3-basic-rs751402 G/A-rs2296147 T/C四条重组质粒之间启动子活性比较无显著性差异(p＞0.05)。 结论: 1、ERCC5 rs751402多态增加胃癌发病风险，尤其是弥漫型胃癌发病风险更高;rs2296147多态增加弥漫型胃癌的发病风险。 2、ERCC5 rs751402多态与肠型胃癌预后有明显相关性，携带rs751402AA基因型个体的胃癌患者生存期明显缩短。AA型是胃癌患者预后危险因素。 3、XPG表达与胃癌发生发展有关。胃癌组中XPG的表达水平明显高于癌旁组织;在由浅表性胃炎(SG)到萎缩性胃炎(AG)到胃癌(GC)的疾病进程中，AG和GC的XPG表达明显高于SG。 4、XPG的表达水平与Laurens分型显著相关，弥漫型胃癌的表达低于肠型胃癌。 5、XPG是胃癌患者独立的预后因素，XPG表达高者生存期明显延长。 6、ERCC5 rs751402多态影响其编码蛋白的表达;携带ERCC5 rs751402AA型的个体XPG蛋白表达低于GG型及GG+AG型。 7、ERCC5启动子区不同单体型片段启动子活性无显著性差异。