羊肉中脂肪含量的高低直接影响其肉质品质。前体脂肪细胞的增殖和分化是脂肪发育和功能维持的重要生物学过程。研究表明,CBX7和SP1在脂质代谢中具有重要作用。敲除CBX7的小鼠呈现肥胖表型,体外实验过表达CBX7抑制3T3-L1细胞的分化和脂质沉积;在人间充质干细胞中添加SP1特异性抑制剂可以抑制其向脂肪细胞分化,进而抑制脂质囊泡的形成。然而CBX7和SP1对绵羊前体脂肪细胞增殖和分化的作用及调控机制不甚清楚。本试验以绵羊3种不同的脂肪组织和尾部前体脂肪细胞为研究对象。通过免疫细胞化学方法确定CBX7蛋白在绵羊前体脂肪细胞发挥功能的位置,实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative PCR,RT-q PCR）检测绵羊不同脂肪组织中CBX7的表达规律,PCR克隆绵羊CBX7和SP1的全长CDS（coding sequence）,生物信息学软件分析CBX7和SP1编码区的核酸与氨基酸序列。利用慢病毒包装法在绵羊前体脂肪细胞中过表达或抑制表达CBX7和SP1,RT-q PCR、Western blotting、CCK-8、油红O染色等方法研究CBX7和SP1对绵羊前体脂肪细胞的调控作用。以绵羊基因组DNA为模板构建5个不同长度的CBX7启动子片段载体,并转染到C3H10T1/2和绵羊前体脂肪细胞中,通过双荧光素酶报告试验检测各缺失片段荧光素酶活性,以确定影响其转录活性的关键区域。生物信息学方法和双荧光素酶报告系统试验预测并验证SP1在CBX7启动子上的结合位点,在绵羊前体脂肪细胞中过表达或抑制表达SP1后,RT-q PCR检测CBX7的表达量,以研究SP1调控CBX7对绵羊前体脂肪细胞分化的作用。结果如下:1.绵羊CBX7的克隆、表达分析及亚细胞定位绵羊CBX7 CDS全长756 bp,编码251个氨基酸;CBX7蛋白有109个潜在磷酸化位点,存在1个克罗莫结构域和1个多梳抑制框结构域;序列相似性分析显示,绵羊CBX7 CDS区编码序列与山羊的相似性最高,其次是牛、猪、马、鸡、人,与小鼠、大鼠的相似性最低,与系统进化分析结果相符;CBX7 m RNA在绵羊尾部脂肪组织中表达量最高,其次是肾周脂肪,皮下脂肪的表达量最低。CBX7在C3H10T1/2细胞和绵羊前脂肪细胞中均有表达,均定位于细胞核。2.CBX7促进绵羊前体脂肪细胞增殖在绵羊前体脂肪细胞中过表达CBX7,与对照组相比,极显著上调了CBX7、Cyclin B和PCNA的m RNA表达量（P＜0.01）,显著上调了Cyclin D的m RNA表达量（P＜0.05）;细胞活力显著增强。抑制CBX7后,与对照组相比,Cyclin D的m RNA表达量极显著下调（P＜0.01）,CBX7、Cyclin B和PCNA的m RNA表达量显著下调（P＜0.05）;细胞活力显著降低。表明CBX7促进绵羊前体脂肪细胞的增殖。3.CBX7抑制绵羊前体脂肪细胞分化随着绵羊前体脂肪细胞的分化,CBX7的表达量总体呈下降趋势。在绵羊前体脂肪细胞中过表达CBX7,成脂标志基因PPARγ、C/EBPα、Adiponectin、FABP4的m RNA表达量极显著下调（P＜0.01）。抑制CBX7后,成脂标志基因PPARγ、C/EBPα和FABP4的m RNA表达量显著上调（P＜0.05）,Adiponectin的m RNA表达量极显著上调（P＜0.01）。表明CBX7抑制绵羊前体脂肪细胞分化。4.转录因子SP1促进CBX7的表达转染5个启动子缺失片段载体到C3H10T1/2和绵羊前体脂肪细胞后,CBX7启动子-554～+302区域显示出最强的荧光活性。在CBX7启动子-311～-298区域存在SP1结合位点。过表达SP1后,CBX7的m RNA表达量显著增加（P＜0.05）,抑制SP1则CBX7的m RNA表达量极显著减少（P＜0.01）。表明转录因子SP1促进CBX7的表达。5.转录因子SP1促进绵羊前体脂肪细胞分化绵羊SP1 CDS全长2 340 bp,编码779个氨基酸;SP1蛋白定位于细胞核,有109个潜在磷酸化位点,二级结构和三级结构均显示存在3个锌指结构域;序列相似性分析显示,绵羊SP1 CDS区编码序列与山羊的相似性最高,其次是牛、马、猪、人、小鼠、大鼠,与鸡的相似性最低,系统进化分析结果与之相符。在绵羊前体脂肪细胞中过表达SP1,显著上调了SP1和成脂标志基因的m RNA表达量（P＜0.01）。抑制SP1后,结果相反。表明SP1促进绵羊前体脂肪细胞分化。综上所述,SP1对绵羊前体细胞分化具有正调控的作用;CBX7对绵羊前体脂肪细胞增殖具有促进作用;CBX7受SP1调控,对绵羊前体脂肪细胞分化具有抑制作用。