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近几年的研究揭示，哺乳动物、酵母和果蝇等昆虫发生的程序性细胞死亡(programmed cell death PCD)途径有两种，一种是细胞凋亡(apoptosis)，另一种是细胞自噬性死亡(autophagy)，分别被称为I型PCD和Ⅱ型PCD。家蚕(Bombyxmori)作为鳞翅目的模式代表昆虫，迄今为止有关家蚕变态期幼虫组织发生自噬和凋亡的研究还非常少见，其PCD分子调控机制更不清楚。
在家蚕变态期，由于蜕皮激素(ecdysone hormone，EH)的诱导，幼虫组织将发生自噬和凋亡的细胞死亡。为研究家蚕变态期的PCD机制和鉴定家蚕凋亡相关基因的功能，本文对家蚕PCD机制中的5个凋亡相关基因(BmCF1、BmE75A、BmIAPBmIce-2、Bmcaspase-1)进行了克隆，并对BmCF1、BmICE-2和Bmcaspase-1进行了原核表达和对BmICE-2以及Bmcaspase-1蛋白的分离纯化。以此结果为后续研究的RNA干扰实验，抗体制备的免疫组化和免疫电镜实验提供前期储备。
本研究获得的主要结果如下：
(1)提取家蚕变态期吐丝1d和化蛹24h的中肠总RNA，采用RT-PCR的方法分别获得的5条家蚕凋亡相关基因的cDNA序列为：蜕皮激素的受体USP基因BmCF1、E75族转录因子基因BmE75A、凋亡抑制蛋白IAPs基因BmIAP和Caspases基因BmIce-2、Bmcaspase-1。
(2)将BmIce-2和Bmcaspase-1克隆至pTA2载体，将BmCFI(USP)、BmE75A和BmIAP克隆至pGM-T载体，进行PCR鉴定和测序鉴定，表明克隆获得的这些基因序列中，除个别碱基位点外，序列与预期相符，阅读框正确。
(3)将BmCF1、BmIce-2和Bmcaspase-1序列克隆至pET-21d表达载体中，利用pET-21d原核表达系统，成功地对这3个凋亡相关基因进行了原核表达。可溶性分析结果表明，这3个基因的表达蛋白主要为包涵体蛋白。
(4)对含有Bmlce-2、Bmcaspase-1和BmCF1基因的表达宿主菌进行了高效表达的诱导条件优化，确认的优化条件为：对Bmlce-2靶基因，在起始菌液浓度为OD600=0.8时，用IPTG浓度1.2mmol/L诱导3h：对Bmcaspase-1靶基因，在起始菌液浓度为OD600=0.5时，用IPTG浓度1.0mmo1/L诱导4h：对BmCFl靶基因，在起始菌液浓度为OD600=0.5时，用IPTG浓度0.8mmo1/L诱导4h。
(5)通过Ni-NTA亲和层析(pH梯度法)的方法，对家蚕Bmlce-2、Bmcaspase-1基因的表达蛋白进行了分离纯化和透析复性处理，获得在其C端含有6×His-Tag的目的蛋白，纯度可达90％以上，为以后抗体制备提供了实验样品。