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本试验使用PCR技术和电泳检测技术,利用CHD基因和EE0.6序列的相关引物及引物组合,对白枕鹤、蓑羽鹤、黑冠鹤、丹顶鹤、灰鹤共52个个体进行了准确的性别鉴定。为了了解鹤类的遗传多样性状况,本研究利用鸟类线粒体DNA控制区通用引物对白枕鹤、蓑羽鹤、丹顶鹤、灰鹤共42个个体进行PCR扩增,并以获得的序列为基础,设计了鹤类线粒体DNA控制区特异性引物,通过对上述鹤线粒体DNA控制区部分序列PCR产物进行克隆测序,深入系统地评估群体的遗传多样性水平,探讨四种鹤的系统发育关系。主要研究结果如下:1、利用CHD基因引物2550F/2718R和EE0.6序列的九个引物组合对白枕鹤、蓑羽鹤、黑冠鹤、丹顶鹤和灰鹤总DNA进行扩增,扩增产物经检测显示雌性为两条带,雄性为一条带,成功鉴定了这五种鹤共52个个体的性别,并有效防止假阴性结果的干扰。2、对白枕鹤、蓑羽鹤、丹顶鹤和灰鹤共45条线粒体DNA控制区长度为605bp的序列进行系统分析,得到A、C、G、T这4种核苷酸的平均比例分别为28.80%、23.80%、14.50%和32.90%。A+T含量61.70%,高于G+C含量;共发现79个变异位点,约占分析位点总数的13.72%,其中单一多态位点20个(3.47%),简约信息位点59个(10.24%)。共发现7种变异类型:转换,颠换,插入/缺失,以及转换和颠换在同一位点上,插入/缺失和转换在同一位点上,插入/缺失和颠换在同一位点上,插入/缺失和转换、颠换在同一位点上。79个变异位点中,转换66次,占83.54%;颠换6次占7.59%;转换和颠换在同一位点7次,占8.86%;共有插入/缺失29次(4.79%,29/605),其中插入/缺失与转换在同一位点上7次;插入/缺失与颠换在同一位点上1次;插入/缺失和转换、颠换在同一位点上1次。共发现33种单倍型,各个鹤群体间没有共享单倍型。四个鹤群体单倍型多样度差异不大,从0.889到1.000,单倍型多样度总体为0.974±0.018,可见总体的单倍型多样度丰富;白枕鹤的核苷酸多样度最高,为0.684%,四种鹤总体的平均核苷酸差异数为23.941,核苷酸多样度为4.156%,可见四个鹤群体内部的多样性程度较低,而群体间的多样性程度较高。群体间核苷酸分歧度(Dxy)在5.225%～6.649%之间变化,核苷酸净遗传距离(Da)为4.847%～6.270%,核苷酸分歧度和核苷酸净遗传距离差异均不大。四种鹤群体间kimura双参数距离变异范围为0.054～0.070。四种鹤线粒体DNA控制区序列群体间的方差组分(Va)占总变异的93.86%,群体内的方差组分(Vb)占总变异的6.14%。Fst=0.93863,差异极显著(P <0.01),四种鹤间存在显著的遗传分化。3、对四种鹤线粒体DNA控制区33种单倍型构建系统发生树和网络关系图, NJ、ME和UPGMA分子系统树明显分为4个类群,各类群中包含的单倍型为各个鹤群体所特有。单倍型网络关系图中的序列也明显聚为4个聚类簇,与单倍型系统发生树的结果完全一致。线粒体DNA控制区部分序列单倍型的系统发生树中,丹顶鹤的特定单倍型和灰鹤所独有的单倍型聚为一类,之后与只出现在蓑羽鹤中的单倍型聚为一类,最后与白枕鹤的特定单倍型聚为一大类。4、对测定的四种鹤控制区序列采用Tajima’s D值进行中性检验,结果发现除蓑羽鹤外,各群体中性检验的Tajima’s D值介于-1.16172和-1.47797之间,经检验均不显著(P >0.05),符合中性突变。但是蓑羽鹤中性检验的Tajima’s D值为-2.01307(P﹤0.05),不符合中性突变。