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乙基亚硝基脲(即ENU)诱变是表型驱动法研究基因功能的重要手段。本实验室开展了一定规模的小鼠ENU诱变实验,培育了9个突变系小鼠,并采用基因组扫描及位置候选策略,对一种白斑突变基因Kitι-2Bao进行了染色体定位及鉴定。具体工作如下:
1.利用ENU处理C57BL/6J(B6)成年雄鼠123(G0代)只,与同品系雌鼠配种繁殖3048只G1代小鼠,经筛查获得表型异常小鼠154只。将所有存活的G1代突变小鼠分别与正常B6交配,观察后代是否有亲代的异常表型,获得9种突变系小鼠:5种白斑、1种卷尾、3种眼睛异常。其中,504#号突变小鼠表现为腹部白斑、尾端及四肢端白化,遗传模式为单基因显性,外显率100%,该突变系小鼠被命名为Kitι-2Bao。
2.以Kitι-2Bao白斑突变小鼠为研究对象,利用连锁分析法对突变基因进行染色体定位,发现其与D10Mit70之间的LOD值为7.08,确定连锁,进一步将该突变基因定位在第10号染色体距着丝粒47.06cM到54.72cM之间。根据表型特征及小鼠基因组信息,确认白斑候选基因为Kitι。随后设计引物,RT-PCR扩增Kitι基因的mRNA,测序发现Kitι基因ORF第697位碱基由G转换为T,造成相应氨基酸G不能合成。
本实验培育的突变系小鼠可望开发成为数种人类疾病模型;对Kitι-2Bao的工作不仅确认了一种新的人类斑驳病模型,而且丰富了小鼠遗传图,为Kitι基因的功能研究打下坚实基础。