母猪产仔数是重要的经济性状,胚胎附植期是影响母猪产仔数的关键阶段之一,因而研究胚胎附植的调控机制对于养殖业有重要的理论和实践意义。在大白猪与梅山猪不同妊娠时期猪子宫内膜转录组测序的基础上,通过生物信息学分析,筛选出可能调控胚胎附植的miRNAs:ssc-miR-378、ssc-miR-370、ssc-miR-9843-3p。并利用实时定量PCR、Western blot、超表达及干涉等技术,研究ssc-miR-378在猪子宫内膜中的表达调控,主要研究结果如下:1.利用实时定量PCR技术,对ssc-miR-378、ssc-miR-370和ssc-miR-9843-3p在妊娠不同时期的大白母猪和梅山母猪子宫内膜组织中进行定量分析以及组织表达谱分析,结果表明miRNAs表达趋势与测序结果基本一致。在妊娠的第18天,ssc-miR-378在梅山猪的表达量显著高于大白猪;ssc-miR-378在大白猪妊娠的第12天的表达量显著高于妊娠的第15天,ssc-miR-378在大白猪妊娠第15、18、32天的表达量依次显著上调;ssc-miR-378在梅山猪妊娠第32、18天的表达量都显著高于第15天的表达量。在妊娠的第12天、32天,ssc-miR-370在梅山猪中的表达量显著高于大白猪的表达量;ssc-miR-370在大白猪妊娠第9天的表达量显著高于第18天、32天的表达量;ssc-miR-370在梅山猪妊娠第12天的表达量极显著高于第15天、18天的表达量。在妊娠第12天和32天,ssc-miR-9843-3p在梅山猪中的表达量显著高于大白猪;ssc-miR-9843-3p在大白猪妊娠第9天的表达量显著高于第12天和第15天的表达量;ssc-miR-9843-3p在梅山猪妊娠第32天的表达量显著高于妊娠第15天和第18天的表达量。2.根据前期定量验证和相关报道,筛选ssc-miR-378进行后续实验,在转染ssc-miR-378 mimic和NC后,实验组CTGF的表达量与对照组相比极显著降低;在转染ssc-miR-378 inhibitor和inhibitor NC后,实验组CTGF的表达量与对照组相比显著升高;Western结果与定量结果一致。3.利用双荧光素酶试验,验证ssc-miR-378与CTGF 3’UTR结合位点,构建CTGF3’UTR野生型与突变型载体,将野生型载体分别与ssc-miR-378 mimic、NC进行共转,实验组与对照组相比荧光活性显著降低;将野生型载体与ssc-miR-378 inhibitor、inhibitor NC共转后,实验组与对照组相比荧光活性显著升高;而将突变载体与ssc-miR-378 mimic或ssc-miR-378 inhibitor共转,实验组与对照组相比,荧光活性都不发生显著变化。说明ssc-miR-378与CTGF 3’UTR直接结合,从而影响CTGF的转录与翻译。4.对CTGF在妊娠不同时期的大白母猪和梅山母猪子宫内膜组织中进行定量分析以及组织表达谱分析,结果表明,在妊娠第9、18天,CTGF在大白猪中的表达量显著高于梅山猪的表达量;CTGF在大白母猪妊娠第9天的表达量显著高于第18、32天的表达量,CTGF在大白母猪妊娠第18天的表达量显著高于第32天的表达量;而CTGF在梅山母猪妊娠第18天的表达量显著高于妊娠第9天的表达量。CTGF在子宫内膜中的免疫组化结果表明,CTGF在于子宫内膜上皮细胞、基质层的子宫腺细胞及血管内皮细胞中都有表达。5.获得了CTGF 5’UTR上游2083bp的片段,构建7个重组缺失片段载体,双荧光素酶实验表明,Q4（-1285～+10）缺失一段序列成Q5（-988～+10）荧光活性极显著降低,推测-1285～-988存在正调控元件;Q6（-765～+10）缺失一段序列成Q7（-294～+10）荧光活性显著升高,推测-765～--294存在负调控元件。利用JASPAR和PROMO软件对包含正负调控元件的区域进行分析,在-1285～-988区域可能存在NF-1、SF-1和CEBPA的结合位点,-765～--294区域可能存在TGIF、HOXD10和Sox2的结合位点。6.利用构建的CTGF超表达载体,在超表达CTGF后,ANGPTL4的表达量显著上升,SMAD2、TGFB1、AKR1C1的表达量极显著降低。干涉CTGF后,ANGPTL4的表达量极显著降低。综上所述,ssc-miR-378可以通过靶向CTGF 3’UTR,调控CTGF的表达,CTGF正调控ANGPTL4的表达。有文献表明h CTGF能在人绒毛膜滋养层细胞中刺激血管的形成,ANGPTL4也参与血管生成,推测ssc-miR-378可能通过影响CTGF以及ANGPTL4等表达,来调控子宫内膜的血管生成,影响胚胎附植等过程。