【摘 要】
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转基因技术作为一种高尖端的现代生物技术,在为现代人类社会作出巨大贡献的同时,其本身也存在着许多问题,生物安全性就是其中最主要的问题之一。目前世界各国都在着手应对转基因
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转基因技术作为一种高尖端的现代生物技术,在为现代人类社会作出巨大贡献的同时,其本身也存在着许多问题,生物安全性就是其中最主要的问题之一。目前世界各国都在着手应对转基因动植物所带来的安全性问题。其中筛选标记基因的去除已经成为人们研究的热点。
在筛选标记基因的去除方法中,应用基因工程的手段,在无筛选标记基因构建时,剔除可能带来不利影响的标记基因,建立无选择标记植物转化系统,培育无选择标记的转基因植物。这个研究无论是从安全性考虑,还是从转基因技术本身考虑均有重要意义。
本研究通过构建无筛选标记的植物表达载体,利用农杆菌转化法成功转化无筛选标记的转基因植株,通过PCR技术成功筛选出只含目的基因,不含有筛选标记基因的转glgC基因马铃薯,获得无潮霉素筛选标记和无GUS筛选标记的转glgC基因马铃薯。研究表明:通过PCR筛选可以获得无筛选标记转基因马铃薯,无筛选标记转基因植株与筛选标记转基因植株表型无差异,其目的基因表达与筛选标记基因无关。
本研究取得以下结果:(1)成功构建了无筛选标记植物表达载体3个;(2)经农杆菌介导的遗传转化方法介导无筛选标记表达载体在马铃薯体内成功表达;通过PCR筛选及个RT-PCR检测表明获得马铃薯阳性转化株系11株;(3)初步验证glgC基因在植物的块茎表达,在不同的转化子中表达有差异;(4)发现glgC基因在不同品种中表达存在差异;(5)初步验证无筛选标记转glgC重组基因马铃薯中AGPase酶活性与直链淀粉含量显著负相关。
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