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目的：
采用巢式PCR-克隆测序的方法对PCA3基因启动子富含A+T的区域进行基因分型,探讨PCA3基因启动子富含A+T区域的多态性与前列腺癌易患性的关系,及与前列腺癌分化程度的关系。
方法：
1.根据GenBank中PCA3(序列号AL359314)序列,设计针对启动子片段包含富含A+T区域的巢式PCR的一对外引物和一对内引物,优化反应体系,巢式PCR产物经凝胶电泳后为单一清晰条带,而后测序分析PCA3启动子的基因型。
2.收集129例前列腺癌(PCa)和155例前列腺增生(BPH)患者的石蜡组织,巢式PCR-测序分析组织中PCA3启动子多态性与PCa易患性的关系,与前列腺癌分化程度的关系。
结果：
1.PCA3启动子富含A+T的区域存在基因多态性,经过测序发现除了野生型外,还有包括纯合突变和杂和突变行在内的共16种基因型。C3T5/C2T5型在人群中的分布最多,分别在PCa组和BPH组占46％和40％。C3T5/C1T7、C3T5/C1T8、C2T5/C1T7、C2T6/C1T8、C3T4/C1T8等在人群中的分布频率极低。
2.经卡方检验分析,我们发现,在含有C3T5等位基因片段的基因型中随着TAAA重复次数的增加,PCa的阳性率有明显的升高,X2=8.620,P=0.013,差异有统计学意义。在不含有C3T5等位基因片段的基因型中,同样随着TAAA重复次数的增加,PCa的阳性率也有明显的升高,X2=19.911,P=0.000,差异有统计学意义。
3.在含C3T5等位基因片段的基因型中,随着TAAA重复次数的增加,分化程度低的PCa在这些基因型中的构成比有增加趋势,差异有统计学意义,X2=30.91,P=0.000。而在不含有C3T5等位基因片段的基因型中,随着TAAA重复次数的增加,不同分化程度的PCa在这些基因型中的构成比差异无统计学意义,X2=0.328,P=0.849。
结论：
PCA3启动子富含A+T区域的基因型与PCa的易患性有关,随着TAAA重复次数增加PCa的阳性率明显升高。这段序列可能也与PCa的分化程度有关,为PCa的发生机制提供理论依据。