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目的:胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,其中约半数为胶质母细胞瘤。胶质母细胞瘤恶性程度高,经常规手术及放化疗等综合治疗后5年生存率极低,极易复发。因此,探索胶质母细胞瘤的分子靶向治疗具有一定的应用前景。RNA结合蛋白参与了RNA代谢的多个过程,包括RNA剪切、定位以及转运等。RNA结合蛋白的失调可以导致包括肿瘤在内的多种疾病。EIF4A3是外显子连接复合体(exon junction complex,EJC)的一个核心组成部分,在RNA代谢过程中发挥重要作用。EJC可以调节脑发育、神经元生长和神经元活性。但EIF4A3在胶质母细胞瘤中的作用与机制目前尚未见报道。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA,在肿瘤发生发展中具有重要的调节作用。针对lncRNA的靶向治疗是肿瘤治疗的新途径。LINC00680可以作为一些软组织肉瘤预后的生物学标志物。TTN-AS1可以促进食管上皮鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭转移。但LINC00680和TTN-AS1在胶质母细胞瘤中的作用与机制尚不清楚。miRNA(microRNA)是一类内源性、长度在18-24个核苷酸的非编码RNA,参与转录后及翻译水平的基因调节。上调miR-320b的表达可以促进胶质瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移和侵袭。但其作用机制尚不明确。早期生长反应因子3(early growth response 3,EGR3)是锌指转录因子家族中的一员。EGR3在胶质母细胞瘤中高表达,但其作用机制不清。血小板亲和蛋白2(plakophilin-2,PKP2)在胶质瘤中高表达,并且与肿瘤的级别正相关。但其对胶质母细胞瘤恶性生物学行为的调控方式尚未见报道。本文旨在探究EIF4A3,LINC00680,TTN-AS1,miR-320b,EGR3,PKP2对胶质母细胞瘤生物学行为的调控作用,为胶质母细胞瘤的分子靶向治疗提供新的靶点和策略。研究方法:1.检测EIF4A3,LINC00680,TTN-AS1及EGR3在胶质瘤组织和胶质母细胞瘤细胞系U87、U251中的表达,应用PCR检测LINC00680、TTN-AS1及EGR3 mRNA的表达,应用Western blot检测EIF4A3及EGR3蛋白的表达;2.在胶质母细胞瘤细胞系U87和U251稳定转染EIF4A3沉默质粒、LINC00680沉默质粒,TTN-AS1沉默质粒,EGR3沉默质粒,瞬时转染agomir-320b和antagomir-320b,EGR3过表达质粒(含或不含3’端非翻译区);3.在构建的细胞系中分别检测EIF4A3,LINC00680,TTN-AS1,miR-320b、EGR3及PKP2的表达。应用PCR检测LINC00680、TTN-AS1、miR-320b及EGR3 m RNA的表达,应用Western blot检测EIF4A3、EGR3及PKP2蛋白的表达;4.应用CCK-8法检测胶质母细胞瘤细胞的增殖能力;5.应用Transwell实验检测胶质母细胞瘤细胞的迁移侵袭能力;6.应用流式细胞术检测胶质母细胞瘤细胞的凋亡率;7.应用RNA pulldown及RIP检测EIF4A3与LINC00680、TTN-AS1的结合;8.应用半衰期实验检测EIF4A3对LINC00680及TTN-AS1稳定性的影响;9.新生RNA实验检测EIF4A3对LINC00680及TTN-AS1新生的影响;10.应用双荧光素酶报告基因检测miR-320b与LINC00680、TTN-AS1的结合,miR-320b与EGR3 mRNA的结合;11.应用RIP检测LINC00680、TTN-AS1与miR-320b参与构成RISC;12.应用ChIP检测EGR3与PKP2启动子区的结合;13、应用裸鼠移植瘤实验检测EIF4A4、LINC00680与TTN-AS1对成瘤能力及生存期的影响。结果:1.EIF4A3、LINC00680、TTN-AS1及EGR3在胶质瘤组织及胶质母细胞瘤细胞系中高表达;2.EIF4A3可以靶向结合LINC00680、TTN-AS1;沉默EIF4A3可以下调LINC00680、TTN-AS1的表达;沉默EIF4A3、LINC00680及TTN-AS1可以抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移侵袭,促进细胞凋亡;3.沉默EIF4A3未改变LINC00680及TTN-AS1的生成,而缩短了二者的半衰期;4.miR-320b可以分别结合LINC00680与TTN-AS1,并参与构成RISC。沉默LINC00680与TTN-AS1可以上调miR-320b的表达;5.沉默miR-320b可以促进胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移侵袭,抑制细胞凋亡;过表达miR-320b可以抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移侵袭,促进细胞凋亡;6.mi R-320b可以靶向结合EGR3 mRNA,沉默miR-320b可以上调EGR3的表达,过表达miR-320b可以下调EGR3的表达;7.沉默EGR3可以抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移侵袭,促进细胞凋亡;8.EGR3可以与PKP2启动子区结合;9.沉默EIF4A3、LINC00680、TTN-AS1、EGR3,过表达miR-320b可以下调PKP2的表达,沉默mi R-320b可以上调PKP2的表达;10.miR-320b与EGR3mRNA 3’-UTR结合可以下调PI3K/Akt的表达;11.沉默EIF4A3、LINC00680及TTN-AS1的单独及联合应用可以抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,延长裸鼠生存期。结论:1.EIF4A3、LINC00680、TTN-AS1及EGR3在胶质瘤组织及胶质母细胞瘤细胞中高表达。分别沉默EIF4A3、LINC00680、TTN-AS1、EGR3,均能抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。2.EIF4A3能够增加LINC00680、TTN-AS1的稳定性。LINC00680、TTN-AS1分别与miR-320b特异性结合,miR-320b与EGR3的3’-UTR区靶向结合。EGR3与PKP2的启动子直接结合,促进其转录。3.沉默EIF4A3通过降低LINC00680/TTN-AS1的稳定性,减少LINC00680/TTN-AS1与miR-320b的结合,增加miR-320b对EGR3的负性调控作用,从而抑制EGR3对PKP2的转录促进作用,抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移侵袭,促进细胞凋亡。4.沉默EIF4A3、LINC00680及TTN-AS1的单独及联合应用能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,延长裸鼠生存期。5.EIF4A3/LINC00680(TTN-AS1)/miR-320b/EGR3通路在调节胶质母细胞瘤细胞生物学行为中发挥重要作用。