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微生物引发的食源性疾病是食品安全的主要问题,对消费者来说,微生物引起的疾病是对人体最大最直接的危害。金黄色葡萄球菌作为目前最常见的食物中毒病原菌之一,广泛存在于自然界中,食品很容易受其污染。因此建立一种简便可行、快速有效地检测金黄色葡萄球菌的方法,实时检测其在食品加工、贮藏、销售等环节的污染情况,以保障食品安全和消费者健康。本研究选用链霉亲和素纳米磁珠与生物素化金黄色葡萄球菌多抗制备了免疫磁珠,试验优化了免疫磁捕获的反应条件,通过免疫磁珠上的抗体与样品中目标菌的特异性结合,从样品中分离出目标菌,再利用制备的免疫量子点荧光标记,得到磁珠-细菌-量子点复合物进行荧光检测,建立荧光强度与菌液浓度的定标模型,实现快速、定量检测的目的。取得的主要研究结果如下:(1)免疫磁捕获过程中,优化试验结果表明,在试验范围内,各因素影响金黄色葡萄球菌捕获效率的主次顺序为抗体包被磁珠加入量>免疫捕获时间>免疫磁珠加入量,其中抗体包被磁珠加入量和免疫捕获时间为试验的显著影响因素,免疫磁珠加入量为试验的不显著影响因素。最佳捕获条件为选用30μL抗体加入量包被的磁珠,免疫磁珠加入80μL,免疫捕获45min。(2)优化的免疫磁捕获条件可行,对10~3~10~6CFU/mL菌液捕获效率相对稳定。该方法具有较高的灵敏度和特异性,可以捕获到101CFU/mL浓度的菌液,志贺氏菌的加入不会影响免疫磁珠对金黄色葡萄球菌的捕获。(3)量子点标记及荧光检测,得出当金黄色葡萄球菌菌液浓度在10~3~10~6CFU/mL范围内,原菌液中金黄色葡萄球菌浓度的对数值(lg N)与荧光强度(FI)呈较好的线性关系,定标模型为FI=7.6759lg N+35.056,R~2=0.9412;捕获的金黄色葡萄球菌浓度的对数值(lg N’)与荧光强度(FI)也有较好的线性关系,定标模型为FI=7.6944lg N’+38.042,R~2=0.9453。通过计算回收率,表明该方法是可行的。(4)免疫捕获羊肉卷洗水样品中的金黄色葡萄球菌,捕获效率相对于PBS纯菌液的捕获效率有所降低。按已建立的免疫荧光检测方法对含有金葡菌浓度10~6CFU/mL的羊肉卷洗水样品检验,得到的荧光发射峰不明显,荧光强度值过低,检测效果不理想。因此,要将该方法用于实际样品的检测,需进一步研究减少或消除样品中基质的干扰。本研究将免疫磁珠分离技术和量子点荧光标记技术联用,建立了对金黄色葡萄球菌的快速、定量免疫荧光检测方法,整个检测时间在2h之内,可以满足实时检测的需求。初步探索了该方法对食品样品中金黄色葡萄球菌的检测,为后续该方法用于食品样品检测的研究提供了可参考的依据。