目的:利用桂枝茯苓丸含药血清对原代分离培养的子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)间质细胞功能学的影响,通过蛋白质组学技术筛选桂枝茯苓丸含药血清干扰后的间质细胞蛋白中的重要差异靶蛋白,来探讨临床上桂枝茯苓丸治疗子宫内膜异位症的分子学机制。方法:1.制备桂枝茯苓丸含药血清:取200g左右SD大鼠,根据药物人鼠换算系数计算给药量,分为四组:空白对照组、低浓度组(0.3g/kg)、中浓度组(0.6g/kg)及高浓度组(1.2g/kg)。灌胃给予大鼠制备含药血清。2.CCK-8检测细胞增殖实验:将原代分离培养的EMs间质细胞接种于96孔板中,并设置对照血清组,低、中、高浓度桂枝茯苓丸含药血清组四个组别,CCK-8法检测各组细胞0、24、48、72、96h的增殖情况。3.流式细胞仪技术检测细胞凋亡:10%不同浓度桂枝茯苓丸含药血清作用于间质细胞48h后,收集细胞,Annexin V-FITC/PI双染后,上机检测细胞凋亡情况。4.Transwell检测细胞迁移和侵袭能力:利用Transwell小室底面模仿生物学包膜,Matrigel胶模仿生理侵袭屏障原理,将间质细胞接种于小室内,常规培养48h后固定、染色,并计算细胞迁移侵袭数。5.iTRAQ技术筛选差异表达蛋白:10%含药血清作用间质细胞72h后,提取总蛋白,iTRAQ技术筛选差异表达蛋白质。6.典型差异表达蛋白的验证:选取典型差异表达蛋白1-3个,Western blot验证其蛋白表达水平。结果:1.CCK-8法检测含药血清对间质细胞抑制率的比较:与对照血清组(抑制率为5.7%)比较,各浓度含药血清对间质细胞增殖有明显抑制作用,其中高浓度药物血清组(抑制率为10.4%)对细胞增殖抑制率最高,与其余组比较有统计学意义(P<0.05)。2.细胞凋亡结果:与空白对照血清组(5.8%)相比较,其余组细胞凋亡率增加(P<0.05),其中中浓度药物血清组(26.4%)细胞凋亡率最高。3.细胞迁移与侵袭结果:四组细胞中,对照血清组细胞迁移、侵袭率最高;高浓度桂枝茯苓丸含药血清组细胞迁移侵袭率最低,其差异与对照组比较有统计学意义(P<0.05);且细胞迁移、侵袭量与含药血清浓度成负相关。4.iTRAQ技术筛选差异表达蛋白结果:在桂枝茯苓丸含药血清组间质细胞中表达上调且平均表达丰度在1.2倍以上的蛋白有275个;表达下调且平均表达丰度在0.55倍以上的蛋白有97个。6.Western blot验证结果:根据桂枝茯苓丸含药血清作用间质细胞后的细胞生物学功能改变情况,本课题选取典型差异表达蛋白VPS53、FMNL2进行WB验证。结果显示:与对照血清组对比,在含药血清处理组中,VPS53蛋白显著高表达(P<0.05),FMNL2蛋白显著低表达(P<0.05),结果与iTRAQ一致。结论:1.桂枝茯苓丸含药血清可抑制EMs间质细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡。2.成功筛选出桂枝茯苓丸含药血清作用间质细胞后的差异表达蛋白,其中典型差异表达蛋白VPS53及FMNL2的WB验证与iTRAQ结果一致,但具体的机制还有待进一步研究。