在多糖蛋白结合疫苗诞生之初常用的载体蛋白主要是破伤风类毒素（TT）和白喉类毒素（DT）。然而随着疫苗种类越来越多,人们一定会出现同时接种多个结合疫苗的实例,这时不同疫苗所采用的相同载体蛋白必然出现竞争体内特异性T细胞的情况,而这种细胞数量是有限的,最终可能影响这些疫苗的免疫效果。正因如此为了达到疫苗中载体蛋白使用的多样化需要,很多国家都致力于新型载体蛋白的研究。本研究首次选择融合蛋白氨基酸序列中合适位置的26个氨基酸位点,利用非天然氨基酸标记技术将原有氨基酸位置插入NAEK（一种赖氨酸衍生物,赖氨酸侧链基团被叠氮基团修饰）,对不同位点插入NAEK的融合蛋白进行表达和纯化。纯化后产物SDS-PAGE观察各位点融合蛋白产量,最终E677位点表达稳定性更高,均能达到野生型的70%。选择E677位点表达的融合蛋白用镍重力柱进行纯化,再用（?）KTA Pure系统对其进行组分分析;最后对纯化条件进行优化使其纯度达到80%以上并对达到纯度的融合蛋白进行质谱鉴定。然后将纯化后的融合蛋白与3型和6B型肺炎多糖经click反应完成偶联,所得结合物经纯化后对其各项质量指标进行检测,并配制成疫苗,进行动物实验和免疫学检测,并与CRM197、TT、Hi D以常规结合方式（还原胺化法及CDAP法）与3型和6 B型肺炎多糖的结合产物进行对比。实验结果如下:以Hi D-Hin47为载体蛋白与3型肺炎多糖偶联的结合物的免疫原性稍优于与其余三组结合物的免疫原性,但差异不显著。以Hi D-Hin47为载体蛋白与6 B型肺炎多糖偶联的结合物的免疫原性显著优于以TT、Hi D为载体的结合物的免疫原性,与以CRM197为载体的结合物的免疫原性无显著差异。最后综合以上结果可得出如下结论,Hi D-Hin47具有作为肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗载体蛋白的潜力,值得进行进一步研究。