黑豆（Glycine max（L.）merr）是一种可食用的豆科植物种子,富含蛋白质,维生素和碳水化合物等多种营养成分。黑豆属于药食同源植物,在亚洲有着悠久的药用历史,具有抗氧化、抗糖尿病、抗炎和增强机体免疫力的功能。研究表明天然植物多糖具有多种生物活性,然而,关于黑豆多糖的结构和活性研究尚不多见。基于以上研究背景,我们从黑豆中提取分离了系列多糖组分,并对其结构、生物活性及其分子机制进行了探究。具体进行了以下研究:1黑豆多糖的分离纯化及化学结构的表征。首先采用水提醇沉法和碱提醇沉法提取得到两种粗多糖,分别命名为BBWP和BBAP,然后通过纤维柱和凝胶柱分离纯化得到4种纯多糖,分别命名为BBWPW、BBWPS2、BBAPS2和BBAPS5。我们检测发现BB WPW的总糖含量为（98.88±0.59）%,BBWPS2的总糖、蛋白质和糖醛酸含量分别为（42.30±2.43）%、（22.48±1.38）%和（21.78±0.63）%,BBAPS2的总糖、蛋白质和糖醛酸含量分别为（4.10±0.10）%、（49.50±0.67）%和（3.70±0.00）%,BBAPS5的总糖、蛋白质和糖醛酸含量分别为（9.10±0.97）%、（59.15±0.45）%和（6.52±0.22）%。比较发现水提纯多糖中总糖含量明显高于碱提纯多糖,相反,碱提纯多糖的蛋白质含量明显高于水提纯多糖。此外,高效凝胶渗透色谱法测得BBWPW,BBWPS2,BBAPS2和BBAPS5的分子量分别为2.4×10~4Da,2.02×10~5Da,3.20×10~4Da和3.89×10~4Da。通过单糖组成、氨基酸组成、红外光谱和核磁等方法确定其化学结构,结果表明BBWPW是由→1)-α-Glc-(6→组成的葡聚糖。BBWPS2是主要由甘露糖、鼠李糖,半乳糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖和10.4%氨基酸组成。BBAPS2是主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖和71.7%的氨基酸组成。BBAPS5是主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和51.6%氨基酸组成。根据β-消除反应确定了BBWPS2,BBAPS2和BBAPS5这3种多糖的糖链和肽链连接类型均为O-糖肽键。2黑豆多糖抗氧化活性的评估。我们采用比色法和MTT法测定了黑豆多糖的抗氧化活性。结果表明,BBWPS2对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有一定的保护作用。BBAPS2和BBAPS5具有较好的还原能力、DPPH清除能力和抗氧化能力,且呈剂量依赖关系。这些结果说明黑豆多糖具有良好的抗氧化活性。3黑豆多糖调节免疫活性及响应机制的研究。以原代小鼠脾细胞为模型,MTT法检测黑豆多糖促脾细胞增殖的能力。结果显示这4种黑豆纯多糖均能显著促进脾淋巴细胞增殖。其中,BBWPS2还可以促进脂多糖诱导的B淋巴细胞和伴刀豆球蛋白A诱导的T淋巴细胞增殖。此外,本研究评估了黑豆水提多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节活性及分子机制。我们发现不同浓度的BBWPW和BBWPS2对巨噬细胞均无细胞毒性,并且发现BBWPS2能够通过甘露糖受体介导的信号通路和My D88/MAPK/NF-κB信号通路激活巨噬细胞,促进细胞因子的分泌,调节细胞免疫应答。4黑豆多糖抗癌活性及分子机制的研究。BBWPW显著抑制人宫颈癌细胞（He La）、人胃腺癌细胞（BGC-823）、人大细胞肺癌细胞（NCI-H460）和人乳腺癌细胞（MCF-7）的生长,其中对He La细胞的抑制作用最强。因此,通过转录组（RNA-Seq）分析、mRNA表达、细胞周期和细胞凋亡的分析,探讨了BBWPW抑制He La细胞生长的潜在机制。细胞周期检测结果显示,BBWPW导致He La细胞的生长周期阻滞在G2/M期。基于此结果,我们对BBWPW处理过的He La细胞进行了系统的转录组分析,并通过实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-q PCR）对其靶向抑制癌细胞周期的分子途径进行了检验。结果显示,BBWPW上调了He La细胞中的BAD基因和AKT基因的表达,下调了m TOR,BCL-2和MKK基因的表达。这些结果表明BBWPW通过PI3K/Akt和MAPK信号通路将He La细胞生长阻滞在G2/M期,诱导He La细胞形态发生变化,最终抑制He La细胞的增殖。综上所述,我们从黑豆中获得的这4种纯多糖具有潜在的天然抗氧化作用和免疫调节作用。同时BBWPW还具有抗癌活性,尤其它具有在不损害正常细胞的情况下抑制癌症生长的这一优势,使其有望开发成为一种新型的抗癌药物。我们的研究也为黑豆的经济开发提供了新的视角和科学依据。