论文部分内容阅读
目的：研究COX-2对脂变肝细胞BRL-3A株甘油三酯代谢及Acsl1、Acsl6表达的影响。方法：(1)筛选最佳诱导浓度，诱导细胞脂肪变性：体外培养大鼠肝细胞BRL-3A株，不同浓度医用脂肪乳诱导大鼠肝细胞成脂肪变肝细胞，油红O染色及苏木素复染方法观察各组细胞脂肪变状态，MTT检测细胞增殖活性及ELISA检测诱导前后细胞内TG含量确定最佳诱导浓度。(2)实验分为正常BRL-3A组、脂变BRL-3A组，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组，pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组，pcDNA3.1（+）-r-COX-2组，pcDNA3.1（+）-r-HK组，尼美舒利（200ug/ml）阳性对照组，除正常BRL-3A组外，其余各组均以最佳诱导浓度6%脂肪乳培养24h后，瞬时转染各组对应的质粒，ELISA检测转染后各组细胞内TG含量，RT-PCR检测各组COX-2mRNA、Acsl1mRNA、Acsl6mRNA的表达。结果：（1）医用脂肪乳培养细胞24h诱导细胞脂变，油红染色示肝细胞内空泡脂滴增加，提示细胞脂肪变。ELISA结果表明细胞内TG含量增加。结合油红染色、MTT检测的OD值及ELISA结果确定本实验最佳诱导浓度为6%医用脂肪乳。（2）pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA转染至脂变BRL-3A细胞培养24h后荧光显微镜下观察，细胞质中可见绿色荧光，转染效率达70%以上。（3）ELISA检测转染后各组细胞内TG含量，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组与尼美舒利组TG含量均减少(p<0.05)，以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组减少明显，均低于其余6组(p<0.01)，而pcDNA3.1（+）-r-COX-2组高于其余6组(p<0.05)。尼美舒利组低于pcDNA3.1（+）-r-COX-2组但高于pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组，pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组和pcDNA3.1（+）-r-HK组无明显变化，无统计学意义（p>0.05）。（4）7个组别COX-2、Acsl1、Acsl6基因表达情况：COX-2mRNA表达情况：与正常肝细胞组相比，脂变肝细胞组中COX-2mRNA表达增高(p<0.05)。与脂变肝细胞组相比， pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组及尼美舒利组中COX-2mRNA表达降低(p<0.05)，以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组降低明显(p<0.01)，而pcDNA3.1（+）-r-COX-2组中COX-2mRNA表达增高(p<0.05)。pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组和pcDNA3.1（+）-r-HK组COX-2mRNA无明显增高，无统计学意义（p>0.05）。脂代谢基因Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表达情况：与正常肝细胞组相比，脂变肝细胞中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表达增高(p<0.05)。与脂变肝细胞组相比，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA及尼美舒利组中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表达均降低(p<0.05)。以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组下调明显(p<0.01)，pcDNA3.1（+）-r-COX-2组中Acsl1、Acsl6表达则明显增高(p<0.05)。而pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组和pcDNA3.1（+）-r-HK组中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA无明显改变，无统计学意义(p＞0.05)。结论：（1）沉默COX-2表达，肝细胞脂肪变性减轻；脂变肝细胞内TG含量降低；同时，脂代谢基因Acsl1、Acsl6表达减少。（2）COX-2过表达，肝细胞脂肪变性加重；脂变肝细胞内TG含量增加；同时，脂代谢基因Acsl1、Acsl6表达增加。