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目的:研究COX-2对脂变肝细胞BRL-3A株甘油三酯代谢及Acsl1、Acsl6表达的影响。方法:(1)筛选最佳诱导浓度,诱导细胞脂肪变性:体外培养大鼠肝细胞BRL-3A株,不同浓度医用脂肪乳诱导大鼠肝细胞成脂肪变肝细胞,油红O染色及苏木素复染方法观察各组细胞脂肪变状态,MTT检测细胞增殖活性及ELISA检测诱导前后细胞内TG含量确定最佳诱导浓度。(2)实验分为正常BRL-3A组、脂变BRL-3A组,pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组,pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组,pcDNA3.1(+)-r-COX-2组,pcDNA3.1(+)-r-HK组,尼美舒利(200ug/ml)阳性对照组,除正常BRL-3A组外,其余各组均以最佳诱导浓度6%脂肪乳培养24h后,瞬时转染各组对应的质粒,ELISA检测转染后各组细胞内TG含量,RT-PCR检测各组COX-2mRNA、Acsl1mRNA、Acsl6mRNA的表达。结果:(1)医用脂肪乳培养细胞24h诱导细胞脂变,油红染色示肝细胞内空泡脂滴增加,提示细胞脂肪变。ELISA结果表明细胞内TG含量增加。结合油红染色、MTT检测的OD值及ELISA结果确定本实验最佳诱导浓度为6%医用脂肪乳。(2)pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA转染至脂变BRL-3A细胞培养24h后荧光显微镜下观察,细胞质中可见绿色荧光,转染效率达70%以上。(3)ELISA检测转染后各组细胞内TG含量,pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组与尼美舒利组TG含量均减少(p<0.05),以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组减少明显,均低于其余6组(p<0.01),而pcDNA3.1(+)-r-COX-2组高于其余6组(p<0.05)。尼美舒利组低于pcDNA3.1(+)-r-COX-2组但高于pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组,pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组和pcDNA3.1(+)-r-HK组无明显变化,无统计学意义(p>0.05)。(4)7个组别COX-2、Acsl1、Acsl6基因表达情况:COX-2mRNA表达情况:与正常肝细胞组相比,脂变肝细胞组中COX-2mRNA表达增高(p<0.05)。与脂变肝细胞组相比, pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组及尼美舒利组中COX-2mRNA表达降低(p<0.05),以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组降低明显(p<0.01),而pcDNA3.1(+)-r-COX-2组中COX-2mRNA表达增高(p<0.05)。pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组和pcDNA3.1(+)-r-HK组COX-2mRNA无明显增高,无统计学意义(p>0.05)。脂代谢基因Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表达情况:与正常肝细胞组相比,脂变肝细胞中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表达增高(p<0.05)。与脂变肝细胞组相比,pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA及尼美舒利组中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表达均降低(p<0.05)。以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组下调明显(p<0.01),pcDNA3.1(+)-r-COX-2组中Acsl1、Acsl6表达则明显增高(p<0.05)。而pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组和pcDNA3.1(+)-r-HK组中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA无明显改变,无统计学意义(p>0.05)。结论:(1)沉默COX-2表达,肝细胞脂肪变性减轻;脂变肝细胞内TG含量降低;同时,脂代谢基因Acsl1、Acsl6表达减少。(2)COX-2过表达,肝细胞脂肪变性加重;脂变肝细胞内TG含量增加;同时,脂代谢基因Acsl1、Acsl6表达增加。