论文部分内容阅读
本实验基于毛细管电泳SSR荧光标记,在DNA快速提取、PCR扩增及PCR产物检测等方面建立了一套高通量玉米品种SSR标记检测体系,为大批量玉米品种检测及大规模玉米品种DNA指纹库构建奠定了基础。并用不同的SSR引物对15份自交系进行类群划分,探讨引物的选择对分析结果的影响,为玉米品种检测在引物的选择上提供理论依据。本实验研究结果如下: 1.本实验探索了适用于玉米品种鉴定及DNA指纹库构建的玉米品种DNA快速煮沸法,用快速煮沸法提取了玉米种子胚、胚乳;水培初生根、侧根;种子出苗后的初生根、侧根、胚芽鞘、胚轴、叶片等组织DNA,结果表明,种子胚、胚乳组织;水培2~4d水培初生根、侧根组织;出苗1~5d的胚芽鞘、胚轴组织用快速煮沸法提取DNA效果较好。而且快速煮沸法提取的DNA完全可以用于毛细管电泳荧光标记检测。 2.由于ABI3730XL DNA分析仪的灵敏性很高,普通的PCR扩增反应条件不适应其检测系统。通过调整PCR各反应成份的量以及循环条件,最终确定一套适合该检测系统的PCR扩增及检测体系。 3.本实验用毛细管电泳荧光标记检测法和变性PAGE银染检测法同时对192份玉米品种7个SSR位点检测分析,并比较这两种SSR检测方法的异同。两种方法检测的片段大小基本一致。变性PAGE银染检测法的仪器及试剂成本较低,适宜少量材料的检测分析,尤其是SSR标记的筛选;但其操作过程烦琐,影响因素较多,而且效率较低。毛细管电泳荧光检测法具有高通量、高效率、数据精确、检测系统灵敏等优点,适用于大批量材料的检测分析。 4.本实验以从网上筛选的163对SSR引物对15份国内骨干自交系进行类群划分。163对SSR引物中,有22个引物扩增失败或者出现严重的缺管现象,其余的141对SSR引物分别检测到2~8个allele,共检测到665 allele,平均每个引物检测到4.7个allele,各引物的PIC值为0.24~0.844,平均PIC值为0.68。选择不同的引物对15个自交系进行聚类分析,结果表明,选用不同的SSR引物对15份自交系的聚类分析结果影响较大。