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背景: 凋亡(Apoptosis)是由基因介导的存在于细胞中的自毁机制,帮助机体清除衰老及异常细胞,并在维持多种细胞功能方面起到重要作用。它可以是生理性的,也可以是由化疗药物及放射诱发的。 炎性小体(inflammasome)是由多种蛋白质组成的复合体,分子量约700 KDa。炎性小体能够调节caspase-1的活化进而在天然免疫防御的过程中促进细胞因子前体pro-IL-1β和pro-IL-18的切割成熟。还能调节caspase-1依赖的形式编程性细胞死亡,诱导细胞在炎性和应激的病理条件下死亡。因此,炎性小体在炎症引起的凋亡过程中发挥重要作用。 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase)是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶,与真核细胞凋亡密切相关,并参与调节细胞生长和分化。其中,caspase-1是最早被发现的参与凋亡的蛋白酶之一,主要参与激活调控过程。caspase-1可直接参与级联反应,具有循环放大作用,是Fas介导细胞凋亡级联反应中的重要蛋白酶,可将其他因子水解激活为活性酶形式,进而裂解ADP核糖聚合酶,最终导致DNA片段化致使细胞凋亡。 白细胞介素(interleukin,IL)是由多种细胞产生并能作用于多种细胞的一类细胞因子,参与调节多种细胞行为。其中IL-1β又名前炎症反应细胞因子,主要由单核巨噬细胞分泌,具有刺激单核细胞脱颗粒作用。IL-1β在炎症相关周期综合症及其他遗传性疾病、多基因相关自身免疫性疾病中发挥重要作用,且部分此类疾病经过抗IL-1β治疗已得到较好的控制。在其他研究中,caspase-1与IL-1β可以共同参与多种器官组织的炎症反应和凋亡过程。 目的: 观察利多卡因对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞(raw264.7)凋亡、caspase-1和IL-1β表达的影响,探讨利多卡因在脂多糖诱导相关炎症保护作用中的机制。 方法: 将单层培养于6孔板中的小鼠巨噬细胞(raw264.7)随机分为四组:对照组(C组),利多卡因(Lidocaine)组(L组),脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)组(LPS组),利多卡因+脂多糖组(L+LPS组)。分别采用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RealtimePCR,RT-PCR)法检测细胞中caspase-1、IL-1β的mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养液中caspase-1、IL-lβ的蛋白表达水平。 结果: 1、与C组相比较,L组细胞凋亡率,caspase-1、IL-1β的mRNA表达和caspase-1、IL-1β的蛋白表达无明显变化(P>0.05); 2、与C组相比较,LPS组细胞凋亡率显著增高(P<0.05),caspase-1的mRNA表达水平显著增高(P<0.05),IL-1β的mRNA表达水平显著增高(P<0.05),caspase-1的蛋白表达水平显著增高(P<0.05),IL-1β的蛋白表达水平显著增高(P<0.05); 3、与LPS组相比较,L+LPS组细胞凋亡率显著降低(P<0.05),caspase-1的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),IL-1β的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),caspase-1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05),IL-1β的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。 结论: 1、利多卡因预处理可抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞(raw264.7)的凋亡; 2、利多卡因预处理可抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞(raw264.7)caspase-1和IL-1β在核酸水平的过表达; 3、利多卡因预处理可抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞(raw264.7) caspase-1和IL-1β在蛋白水平的过表达; 4、利多卡因抗炎作用可能与抑制免疫细胞凋亡,减少炎性因子释放有关。 意义: 本研究通过观察利多卡因对机体免疫系统的影响,一方面验证了利多卡因的抗炎作用,为将利多卡因应用于临床抗炎治疗中提供了理论依据;一方面提出了利多卡因对机体免疫功能的保护作用可能是与抑制免疫细胞凋亡,减少炎性因子释放有关的假设,为临床抗炎治疗提供了新思路,但这一假设的确切机制尚未明确,还待进一步的深入研究。