新生儿缺氧常导致癫痫发作,且使患儿成年后对致痫因素的敏感性升高,目前尚未明确新生儿期的缺氧性损害是如何导致成年后癫痫易感性升高的。癫痫的产生是由于神经元兴奋作用的增强或抑制作用的减弱或两者兼而有之。γ-氨基丁酸(γ-amino butylic acid,GABA)是中枢神经系统内主要的抑制性神经递质,其抑制作用的减弱或缺乏是癫痫发生的重要原因之一。因此缺氧导致的癫痫易感性升高是否同样与GABA有关成为本研究试图解决的问题。谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)是GABA合成过程中的限速酶,直接影响脑组织中GABA的浓度,实验中常通过对GAD的测定来研究GABA的变化。c-fos是一种即刻早期反应(立早)基因(immediate early genes,IEGs),在神经元兴奋性增加时表达活跃,可作为神经元被激活的标记。在缺氧导致癫痫易感性升高的过程中,c-fos的表达将随着脑部细胞兴奋性的增加而升高。海马组织的兴奋阈值很低,是癫痫易感脑区之-。本研究选用新生大鼠缺氧性痫性发作模型,通过对鼠脑海马组织的HE染色、GAD和c-fos的免疫组织化学反应,观察新生大鼠早期发育过程中及缺氧性痫性发作后不同时间点,海马组织的组织病理变化和不同海马区域的GAD、c-fos表达量的改变,初步探讨GABA在新生大鼠缺氧后癫痫易感性升高中的作用及可能的机制。 材料和方法： 选用新生10d SD大鼠,分成缺氧组与对照组。缺氧组又分为：缺氧后1d(H1d)、缺氧后3d组(H3d)、缺氧后7d组(H7d)和缺氧后14d组(H14d);对照组又分为对照1d组(C1d)、对照3d(C3d)组、对照7d组(C7d)和对照14d(C14d)组。缺氧组采用改良的新生大鼠缺氧性痫性发作模型,在34℃恒温的缺氧箱内,用恒温34℃的含5％O2的混合气体进行缺氧。缺氧过程中对大鼠进行行为学评分(采用经典的Racine标准),评分达4～5级为入组标准。每组均在规定的时间处死大鼠,取脑行冰冻切片,选取典型的海马区脑片,用作苏木素-伊红(HE)染色以及检测GAD、c-fos的免疫组织化学反应。 结果： 1、HE染色结果显示新生大鼠各对照组海马区域细胞排列紧密,形态结构正常；新生大鼠各缺氧组海马区形态结构完整,未见细胞死亡。 2、免疫组化反应显示GABA能神经元在新生大鼠发育过程中表达逐渐升高,新生大鼠对照组GAD灰度值在CA1区从第3d开始升高,并持续到第14d;新生大鼠对照组GAD灰度值在CA3区从第7d开始升高,并持续到第14d;新生大鼠对照组灰度值在DG区从第3d开始升高,并持续到第14d。新生大鼠各对照组之间CA1区、CA3区、DG区GAD灰度值差异有非常显著意义(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。CA1区C3d组、C7d组和C14d组GAD灰度值较C1d组的差值有非常显著意义(P<0.01,P<0.01,P<0.01),C3d组、C7d组与C14d组间两两比较差值无统计学意义。CA3区C7d组和C14d组GAD灰度值较C3d组的差值有非常显著意义(P<0.01,P<0.01),C1d组与C3d组间、C7d组与C14d组间比较均无统计学意义。DG区C3d组、C7d组和C14d组GAD灰度值较C1d组的差值有非常显著意义(P<0.01,P<0.01,P<0.01),C3d组、C7d组与C14d组间两两比较差值无统计学意义。 3、免疫组化反应显示与新生大鼠对照组相比,新生大鼠缺氧组的GAD灰度值在CA1区和DG区缺氧7d后明显降低。CA1区H7d组GAD灰度值与C7d组的差值有非常显著意义(P<0.01),H14d组的GAD灰度值与C14d组的差值有非常显著意义(P<0.01),其余两组间比较无统计学意义。CA3区各缺氧组与各对照组比较差异均无统计学意义。DG区H7d组的GAD灰度值与C7d组的差值有非常显著意义(P<0.01),H14d组的GAD灰度值与C14d组的差值有显著意义(P<0.05),其余两组间比较无统计学意义。 4、免疫组化结果显示与新生大鼠对照组相比,新生大鼠缺氧组c-fos灰度值在海马各区缺氧7d时均明显升高。在海马CA1区、CA3区和DG区,H7d组c-fos的灰度值与C7d组的差值均有非常显著意义(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。 结论： 1、新生大鼠缺氧性痫性发作后未发现海马区域的组织细胞学死亡。 2、在新生大鼠早期发育过程中,GABA能神经元的表达呈进行性增加趋势。 3、缺氧后GABA能神经元含量的减少是缺氧导致新生大鼠癫痫易感性升高的原因之一。