SiRNA特异性沉默HIF-1α对缺氧培养OCM-1细胞运动能力的影响

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目的:采用小干扰RNA技术(siRNA)特异性沉默OCM-1缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),观察不同供氧条件下OCM-1细胞中HIF-1α表达变化,以及沉默HIF-1α前后人OCM-1细胞中c-Met表达及肿瘤细胞运动能力的变化,初步探讨HIF-1α在脉络膜黑色素瘤细胞侵袭转移中的作用。
  方法:体外模拟常氧及缺氧环境培养OCM-1细胞,细胞分为常氧培养组,缺氧培养细胞分为单纯缺氧组,干扰组(转染HIF-1α),阳性对照组(转染β-actin),阴性对照组(转染无义寡核苷酸)和脂质体对照组。采用RT-PCR及Western-blot方法检测不同供养条件下HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达,沉默HIF-1α前后c-Met在mRNA和蛋白水平的表达;Transwell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测常氧培养组、缺氧培养组及干扰组细胞穿膜细胞数,统计分析HIF-1α和c-Met在mRNA和蛋白水平表达变化及细胞穿膜细胞数变化。
  结果:①不同供养环境下OCM-1细胞HIF-1α表达:单纯缺氧组与常氧组比较,HIF-1α蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。②HIF-1α-siRNA转染OCM-1后c-Met表达及细胞运动能力变化:干扰组c-MetmRNA和蛋白表达较其他缺氧组均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),细胞穿膜细胞数下降,差异有统计学意义(P<0.01)。
  结论:①缺氧培养的OCM-1细胞HIF-1α表达增高,HIF-1α表达变化可反映肿瘤的缺氧状态;②HIF-1α-siRNA转染OCM-1细胞可成功下调c-Met的表达,并能抑制细胞运动,HIF-1α在肿瘤侵袭转移过程发挥作用。
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