论文部分内容阅读
目的:探讨sirtuin1(SIRT1)和sirtuin3(SIRT3)在移植肾组织慢性移植肾失功(chronic renal allograft dysfunction,CRAD)早期的表达及其意义。方法:应用国际上公认的CRAD大鼠模型进行F344-Lewis(LEW)大鼠原位肾移植,以F344和Lewis单肾切除大鼠为对照组,术后12周收集血标本和24小时尿标本进行肾功能学检测,收获动物进行肾组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶活性(superoxide dismutase,SOD)检测;组织病理学染色观察实验大鼠肾组织病理变化;应用免疫组织化学染色、蛋白质印迹法、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,PCR)观察SIRT1和SIRT3在肾脏中的表达。结果:1.CRAD大鼠模型造模成功,早期存在氧化应激:观察12周CRAD组大鼠肾功能改变较LEW及F344组大鼠差异有显著意义。CRAD组大鼠24小时尿蛋白定量、尿微量白蛋白/尿肌酐比值、血清肌酐水平明显高于对照组,差异有显著意义(p<0.05);观察组织病理学染色结果显示,12周F344组和LEW对照组肾小球、肾小管及间质结构正常,未见明显的组织学改变;CRAD大鼠肾脏组织学改变包括明显的单个核细胞浸润、弥漫性间质纤维化、小管萎缩、系膜基质增多和细胞增殖,小管及小球基底膜节段增厚;Banff评分总分明显高于F344和LEW对照组。提示CRAD大鼠模型建立成功。观察12周移植大鼠肾组织中MDA含量与SOD活性。与F344及LEW单肾切除对照组大鼠相比,12周移植大鼠肾组织中MDA含量升高,SOD活性降低,差异均有显著意义(p<0.05),提示本研究建立的移植大鼠模型肾组织在CRAD早期存在氧化应激。2.SIRT1在不同组大鼠肾脏表达存在差异:与F344及LEW单肾切除对照组大鼠相比,Western-blot及PCR结果显示12周CRAD模型组大鼠肾组织SIRT 1蛋白水平及其mRNA表达均显著下调,TGF-p1、MCP-1和ICAM-1表达显著上调,其差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色结果显示12周CRAD模型组大鼠肾脏SIRTI表达明显减少,与对照组比差异有显著意义,并且SIRT1表达与移植肾功能、Banff评分、单核细胞浸润及IF严重程度、TGF-β1、MCP-1和ICAM-1呈负相关。3.SIRT3在不同组大鼠肾脏表达存在差异:与对照组相比,12周CRAD模型组大鼠肾组织SIRT3蛋白表达水平降低并且与24h尿蛋白定量、血清肌酐、肾小管间质单个核细胞浸润、血管壁平滑肌细胞向内膜下移行及Banff评分呈负相关。结论:SIRT1和SIRT3可能参与CRAD发病早期氧化应激、炎症及间质纤维化过程,其水平降低在CRAD早期发病机制中起着重要作用,本研究结果为CRAD的早期防治可能提供新的治疗策略和靶点。