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目的： 嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia，Sm）属于非发酵菌，是一种专性需氧的G－杆菌，广泛存在于自然界，如：各种水源、牛奶、土壤、动物及人体等；医院环境如透析装置、中心动/静脉压检测仪、雾化吸入、人工呼吸装置及通气管道等亦可分离到该菌。近10年来，Sm临床分离率呈明显上升趋势，已成为院内感染的重要病原菌，可引起肺炎、脑膜炎、心内膜炎、蜂窝组织炎、尿道及伤口感染、菌血症及败血症等；该菌对多种广谱抗菌药物耐药，给临床治疗带来很大困难。因此，对其耐药机制、耐药基因的传播与转移的研究已引起广泛关注，成为近年来该领域研究的热点。 本课题通过对喹诺酮耐药基因Smqnr、产氨基糖苷类修饰酶基因APH(3’’)-Ⅰ和AAC(2’)-Ⅰ的克隆测序及表达，为进一步进行Smqnr蛋白高级结构测定的结晶试验提供必须材料，同时为了解上述基因表达产物的特性及功能奠定基础，从分子水平开展医院Sm耐药株感染的控制和监测提供依据。 方法： 采用离心柱型DNA抽提纯化试剂盒提取Sm染色体DNA，根据Genbank公布的序列设计特异性引物，以染色体DNA为模板，通过PCR技术扩增Smqnr、APH(3’’)-Ⅰ和AAC(2’)-Ⅰ全基因，PCR产物纯化后与pMD18-T载体连接，连接产物转化大肠杆菌E.coli DH5a,挑取经氨苄筛选的阳性菌落提取质粒并经双酶切鉴定及进行测序。以证实含目的基因的质粒DNA为模板大量扩增目的基因并将其亚克隆入高效原核融合蛋白（GST）表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌E.coli BL21,经双酶切鉴定后以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及免疫印迹法（Western blot）分析表达结果。 结果： 以染色体DNA为模板，PCR扩增出三个大小分别约650bp、800bp和520bp左右的片段并将其成功克隆入T载体。序列比对分析显示Smqnr开放阅读框长660bp，编码24.3kDa蛋白；APH(3’’)-Ⅰ开放阅读框长813bp，编码29.9kDa蛋白；AAC(2’)-Ⅰ开放阅读框长549bp，编码20.2kDa蛋白。三个基因的序列已登录GenBank，登录号分别为HQ315851、HQ315852和HQ315853。成功构建高效表达载体pGEX-4T-1-Smqnr/ APH(3’’)-Ⅰ/AAC(2’)-Ⅰ，经IPTG诱导分别获得分子量约50kDa、56kDa、46kDa的融合表达蛋白，与预期分子量相符。 结论： 成功构建了嗜麦芽窄食单胞菌喹诺酮耐药基因Smqnr、产氨基糖苷类修饰酶基因APH(3’’)-Ⅰ和AAC(2’)-Ⅰ的T载体及高效原核表达载体pGEX-4T-1-Smqnr/APH(3’’)-Ⅰ/AAC(2’)-Ⅰ，IPTG诱导获得3个重组蛋白的大量表达,为了解上述表达产物的特性和功能，以及其对细菌耐药机制的研究奠定基础。