论文部分内容阅读
诸葛菜(Corychophramus Violaceua.L.O.E.Schulz)属十字花科(Cruciferae)芸薹族诸葛菜属的一年生或两年生野生草本植物。诸葛菜的农艺性状良好，生长周期短，生物量大；种子含油量高，营养丰富，品质优异；菜苔氨基酸含量高，口感好；是一种优质的油料资源植物，具有很大的开发价值。同时，诸葛菜作为良好的植物遗传材料，已引起了众多遗传学家的关注，其基础研究也取得了较大的进展。
番茄(Lycopersicon esculentum Mill)系茄科番茄属一年生或多年生草本植物。番茄作为重要的蔬菜和水果，它适应范围广，产量高省养丰富，用途广泛。为了进一步了解番茄的雄配子体发育过程，本论文对番茄花粉进行了组织培养和分子生物学两方面的研究：对番茄未成熟花粉进行离体成熟培养；同时对不同时期番茄花粉的蛋白质表达进行了初步的研究。
1．首先对自然条件下生长的诸葛菜小孢子的发育过程进行观测，得到了小孢子发育时间，小孢子发育阶段与花苞长度的关系。
诸葛菜处于双核早期的未成熟花粉在人工离体培养条件下，发育成了充满淀粉粒的成熟花粉，并能萌发长出花粉管。双核早期未成熟花粉的培养成熟率为11.8％；萌发率为2.4％。
2．对番茄小孢子的发育过程进行自然观测。在天气晴朗的盛花期，活体条件下，番茄花苞内的四分体经历l～2d时问发育形成单核小孢子，再经3～5d发育为二核花粉。从四分体的花苞到开花总共需要7～11d。番茄开花后2～3d，花粉粒开始萌发出花粉管，第四天花被脱落，子房膨大成小番茄。四分体花粉直径为11.3～11.5μm；单核期花粉直径为11.5～17.9μm，单核早期花粉细胞的核位于细胞中央，到了晚期核逐渐移到细胞边缘；双核期花粉直径为18.1～23.4μm，双核早期花粉生殖核圆形，而且淀粉粒丰富，到了后期，核逐渐变为纺锤形。在无菌条件下，对番茄未成熟花粉进行分离并培养，结果表明在人工离体培养条件下，花粉在B3培养基即BK盐＋white’s Vitamins＋椰子汁2％＋20％蔗糖中花粉活性最高，在离体培养第九天还能达到43.9％，并能在此培养基卜经7～9d后发育成熟并萌发出花粉管，萌发频率达到1％。番茄成熟花粉即花冠刚刚打开的番茄花粉进行离体萌发，结果表明，适合番茄成熟花粉离体萌发的液体培养基为D即20％蔗糖＋0.07％ca(N0<,3>)<,2>＋10mg/VB<,1>＋150mg/L H<,3>BO<,3>。在此萌发培养基上，番茄成熟花粉的萌发率达到69.0％。
3．本文同时还对不同发育时期的花粉蛋白做了初步的研究。利用不同发育时期花粉的蛋白粗提液做SDS-PAGE电泳分析，由电泳图谱看出：番茄花粉在单核期出现了分子量为21.2kD，26.0kD，33.4kD，69.1kD和97.1kD的五种特异蛋白，双核期出现了分子量为11.7 kD，16.9 kD，37.3kD，41.2kD和47.1kD的五种特异蛋白，萌发花粉管后出现了分子量为20.5kD，82.SkD)和105.3kD三种特异蛋白。即蛋白质格局随着花粉的发育动态变化：单核期和双核期花粉中相对分子量小的蛋白质明显较多，这与此时期花粉生理活动旺盛有关。