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白僵菌(Beuveria)既是自然界常见的一种虫生真菌,也是经济昆虫家蚕白僵病的典型病原菌。近些年,白僵病在广西和广东部分蚕区的爆发和流行,给蚕农和当地的养蚕业带来了较严重的经济损失。而自然群体中白僵菌寄主多,分布广,存在丰富的物种多样性,因此,收集不同来源的僵蚕和白僵菌,进行其种属鉴定,并比较不同菌株对家蚕的毒力和遗传多样性的分析研究,将有助于更好地查明家蚕白僵病流行和发生的原因,为该病的病原溯源和防控提供实验依据和理论参考。 为了探明从广西和广东收集到的家蚕来源白僵菌菌株及生防菌株之间的关系,本研究用PDA培养基对12株来自广西、广东蚕区及生物防治菌株:Bb1、Bb2、Bb7、Bb8、Bb10、Bb12、Bb13、Bb14、Bb15、Bb16、Bb17及Bb18等分别进行了分离纯化和培养繁殖;基于对各菌株菌落形态和分生孢子的观察和比较分析,初步鉴定了各病原白僵菌;同时对12株白僵菌混育感染家蚕后的感病率进行了调查,并比较了家蚕白僵菌与黄僵菌的毒力差异;最后,对生产来源的病原菌株进行了核糖体基因ITS区域的PCR扩增、测序及系统发育分析;同时结合利用SSR(Simple Sequence Repeats,简单重复序列)技术进行了遗传多态性研究,对生产上病原白僵菌的来源进行了分析和探讨。主要结果如下: (1)家蚕来源的白僵菌Bb1、Bb8、Bb12、Bb14、Bb15、Bb16、Bb17及黄僵菌Bb18等菌株均属于球孢白僵菌(Beauveria bassiana);而生物防治菌株Bb2、Bb10为根霉属(Rhizopus);生物防治菌株Bb7和家蚕来源的Bb13为曲霉属(Aspergillus)。 (2)僵蚕来源的病原菌株Bb1、Bb8、Bb12、Bb14、Bb15、Bb16、Bb17、Bb18及Bb13均能感染家蚕。其中白僵菌Bb8和黄僵菌Bb18对家蚕的半致死浓度LC50分别为:4.54x106个/mL和5.87x106个/mL,菌株间的毒力差异不显著。不同龄期混染不同数量的白僵蚕后,均造成同一群体的健蚕感染白僵病且死亡。 (3)根据白僵菌核糖体基因ITS区域设计合成的引物对不同来源的菌株进行了PCR扩增,均能扩出约550 bp大小的目的条带。目的条带经测序后,进行了生物信息学的分析,结果发现生产来源的白僵菌可分成2个类群,其中家蚕来源菌株Bb1、Bb3、Bb6、Bb8、Bb12、Bb15、Bb16、Bb17、Bb18等菌株与典型的白僵菌(JN038195.1)归为一类;家蚕来源菌株Bb4、Bb5、Bb11、Bb14与典型的白僵菌(FJ025196.1、FJ755242.1、GQ302680.1)单独聚为一类。生物防治菌株Bb2、Bb7单独聚为一类。Bb9、Bb10、Bb13则分属不同的类群。 (4)9对SSR引物对13株白僵菌进行多态性扩增,获得了137条带,平均每对引物扩增出15条带。白僵菌居群内遗传一致度为0.9922和遗传距离为0.0078。说明家蚕来源白僵菌遗传多态性较高,而两广蚕区的病原白僵菌亲缘关系比较相近。 本论文首次对两广地区家蚕白僵菌进行了分子水平的系统发育分析和遗传多样性研究,发现来自不同蚕区病原白僵菌的ITS基因存在一定程度上的差异,但来自广东化州白僵菌和黄僵菌的ITS基因序列相似性为100%。白僵菌居群内存在较高的遗传多样性,为生产上家蚕白僵病的溯源提供了实验参考。