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研究目的:WNT信号通路的激活对多种癌症的进展和转移有着促进作用,但其对于结肠癌的影响及作用机制还没有被广泛论证。OVO蛋白家族在胚胎发育中起着重要的作用,而它在癌症及肿瘤中的研究却少之又少,本文中的OVOL2便是OVO蛋白家族中的一员,它是受WNT信号通路调控的,具有保守锌指结构的转录因子。本文主要研究了OVOL2在结直肠癌细胞中对上皮间质转化过程的影响及其作用机制。 研究方法与手段:在结直肠癌细胞系中利用免疫印迹及实时荧光定量PCR实验确定OVOL2的含量。利用慢病毒及RNA干扰技术使基因过表达或表达沉默;利用细胞划痕、Transwell实验探究细胞迁移及侵袭能力的变化。利用PCRArray技术分析细胞内基因转录水平的变化;利用荧光素酶报告基因确定特定变化对基因转录活性的影响。利用免疫共沉淀实验研究蛋白间相互作用;利用染色质免疫共沉淀、凝胶迁移率实验研究蛋白与DNA间相互作用。利用MSP、BSP实验探究基因启动子甲基化水平变化。 研究结果:通过结直肠癌细胞中OVOL2含量分析发现OVOL2含量与Dukes分期呈负相关趋势;结合免疫印迹、免疫荧光、细胞划痕、Transwell等实验结果发现OVOL2在结直肠癌细胞中对EMT过程有明显抑制作用;PCR Array及荧光素酶报告基因检测实验指出了OVOL2是通过下调SLUG调控EMT进程的;而一系列分子实验表明OVOL2能够帮助β-catenin/TCF4转录复合体募集HDAC1以下调WNT信号通路下游靶基因SLUG的表达;而MSP及BSP实验结果则表明OVOL2在结直肠癌晚期的低表达可能与其启动子甲基化密切相关。 研究结论:OVOL2能够抑制结直肠癌细胞的上皮间质转化作用,而实现这一过程是通过抑制β-catenin/TCF4转录复合体的活力抑制SLUG的表达。OVOL2晚期的低表达可能是结直肠癌获得高侵袭能力的原因之一,而OVOL2启动子甲基化的调控机制还并不明确,针对OVOL2进一步研究有可能对阻止结直肠癌进展与转移起到重大的积极作用。