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猪流行性腹泻病(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猜流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV)引发的一种肠道传染病，自从该病在我国流行以来，给我国养猪业造成了重大的经济损失。猪场主要通过日常消毒和接种疫苗来预防该病，但日前在市场上流行的疫苗并不能到达理想的免疫效果。研究表明仔猪主要通过初乳获得母源SIgA（分泌型免疫球蛋白A）产生对PEDV的被动免疫保护，血液中循环的IgG抗体不能对仔猪产生有效的保护，非经肠道黏膜免疫不能获得SIgA，因此通过肠道黏膜免疫是使仔猪获得免疫保护的重要途径，研制安全有效可以通过肠道黏膜免疫的新型疫苗尤为重要。 S蛋白是由S基因编码的PEDV一个表面结构蛋白，电是PEDV的主要结构蛋白，它含有介导病毒侵入宿主细胞的受体结合域，还含有介导机体产生病毒中和抗体的抗原表位。有可以诱导机体产生中和抗体和提供黏膜免疫保护的作用。COE抗原表位是S基因中的一个重要抗原表位，是由chang等人发现并命名的，这个抗原表位位于S基因的499-638aa区域。自从COE抗原表位被发现后世界各国学者均尝试应用COE抗原表位基因研究制备PEDV的基因工程疫苗。 本实验是研究PEDV主要抗原决定簇COE的原核表达与纯化，为研制新型的猪流行性腹泻病毒疫苗奠定基础。 本实验首先从河南本地的疑似得猪流行性腹泻病的病猪小肠分离出PEDV，然后根据GenBank发表的PEDV-COE序列设计出一对引物，用PCR的方法扩增出长度为420bp的COE目的片段。将目的片段连接在载体PMD19-T上，然后转化到JM109大肠杆菌中，涂板过夜生长，挑菌接种到液体LB中培养扩增、提质粒，鉴定正确后送公司测序，将测序结果与GenBank公布的最相近的4个PEDV-COE序列做比较，发现河南本地PEDV发生了一定的突变，与河南周边地区的毒株具有一定的差异。将COE基因片段连接至PET-32a载体上构建原核表达载体PET-32a-COE，鉴定正确后将表达载体转化到BL21(DE3)pLysS大肠杆菌中。为了探索最佳的诱导条件，我们对IPTG诱导的浓度和时间进行了优化，结果显示0.6mmol/L的IPTG诱导4h能够得到最大量的目的蛋白。我们将诱导表达目的蛋白的大肠杆菌经超声破碎、经镍株蛋白纯化试剂盒纯化，透析复性，最后得到了HIS-COE目的蛋白。HIS-COE目的蛋白的成功表达与纯化为制备能够预防在本地区流行的PEDV的新型疫苗提供了参考，对PEDV基因工程疫苗的研究与制备也具有重要意义。