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目的：检测颗粒溶素(Granulysin,GRA)在不同病期的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者及健康对照组外周血淋巴细胞的表达水平，并同步测定血清中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、γ-干扰素(Interferon-gama，IFN-γ)和白细胞介素-2(Interleukin-2,II-2)浓度。分别比较颗粒溶素和TNF-α、IFN-γ、IL-2在不同病期的COPD患者及健康对照组中表达的差异性，及与上述三种细胞因子血清浓度的相关性。初步探讨COPD患者不同病期颗粒溶素表达特点以及和TNF-α、IFN-γ、IL-2之间的关系，颗粒溶素在COPD患者疾病发展变化过程中可能起到的作用及其意义。
方法：病人来源于泸州医学院附属医院呼吸内科住院患者(2006年3月-2006年6月)，健康对照组均来自门诊健康体检者。清晨空腹抽取COPD患者急性发作期28例，临床缓解期26例，健康对照组23例静脉血10ml。取5ml肝素抗凝的静脉血，分离的淋巴细胞，并制成细胞涂片，采用即用型链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(streptavidin-peroxidase，SP)_9003三步法免疫细胞化学技术操作，以新鲜配制的DAB-H2O2显色，苏木素复染，中性树胶封片。已知阳性细胞涂片作阳性对照，PBS液代替一抗作阴性对照。每个染色流程均设有对照以作为染色质量控制标准。以细胞浆内出现棕黄色颗粒者判为Granulysin阳性细胞。按每张涂片的阳性细胞比例及着色深浅划分为-、+、++、+++四级。基本不着色或着色细胞少于5％为阴性(-)；着色浅淡或着色细胞占5％-25％为弱阳性(+)；着色适中或着色细胞占26％-50％为中度阳性(++)；着色深或着色细胞大于50％为强阳性(+++)。采用双抗体夹心ABC-ELISA法同步测定血清TNF-α、IFN-γ、IL-2浓度。在492nm处测OD值，TNF-α、IFN-γ、IL-2浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中TNF-α、IFN-γ、IL-2的浓度。应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析与统计学图表的绘制，采用X2检验、秩和检验及Spearman等级相关分析等统计方法对数据结果进行处理。P<0.05，有统计学意义。
结果：
①Granulysin在COPD患者及健康对照组的淋巴细胞中的阳性表达信号都主要位于细胞浆，54例COPD患者淋巴细胞中，其阳性表达51例，阴性表达3例，阳性表达率为94.44％(51/54)。其中，急性发作期的阳性表达率为96.43％(27/28)，临床缓解期的阳性表达率为92.31％(24/26)。23例健康对照组淋巴细胞中，其阳性表达4例，阴性表达19例，阳性表达率为17.39％(4/23)。Granulysin在COPD患者和健康对照组淋巴细胞中的阳性表达率分别为94.44％、17.39％二者比较有显著统计学意义(P<0.01)。
②Granulysin在健康对照组的淋巴细胞中Granulysin呈低表达(4/23)，在COPD患者临床缓解期多为中度阳性(17/26)，急性发作期多为强阳性(22/28)，其表达随着病情的变化而消长，三者比较有显著统计学意义(P<0.01)。
③COPD患者急性发作期血清TNF-α浓度为31.96±4.02 pg/ml，IFN-γ,浓度为26.83±6.02pg/ml，IL-2浓度为12.26±5.07pg/ml较临床缓解期和健康对照组显著增高(P<0.01)。临床缓解期血清TNF-α浓度为23.49±4.28pg/ml，IFN-γ,浓度为16.22±4.36pg/ml，IL-2浓度为7.23±3.41pg/ml均低于急性发作期，但仍高于健康对照组14.95±4.71 pg/ml，9.68±3.66 pg/ml。3.92±3.49pg/ml(P<0.05)。
④COPD患者急性发作期和临床缓解期 anulysin表达与血清TNF-α、IFN-γ,、IL-2浓度变化都呈正相关性，并随着病情变化存在明显消长关系，其相关系数分别为0.52和0.59、0.54和0.72、0.79和0.77均．P<0.05。
结论：
①Granulysin参与了COPD炎症过程，起着清除病原体的积极作用。其表达强度的消长与气道或/和肺部病原体的负荷量有关。
②TNF-α、IFN-γ、IL-2与Granulysin在消除病原体方面可能起着相互协同的作用，可能影响Granulysin的释放。
Granulysin在COPD不同病期均有表达，其表达强度与病原体的负荷量有关，在COPD病程中起着控制病原体生长，清除病原体的积极作用，是体内感染的免疫监测指标。Granulysin表达的增强和血清TNF-α、IFN-γ、IL-2浓度的增高呈正相关，可共同清除病原体，对Granulysin的释放可能起着促进的作用。