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研究肌肉发生对于理解动物生长发育过程具有重要意义。蛋鸡和肉鸡是长期选育过程中形成的两大品系,它们在骨骼肌生长速率上存在显著差异。本研究以蛋鸡和肉鸡的肌肉发生为模型,分离蛋鸡、肉鸡的成肌细胞,采用双向电泳(2-D)的方法寻找在肉鸡和蛋鸡成肌细胞中差异表达的基因,并对发现的差异基因进行初步功能研究,为解释蛋鸡、肉鸡的骨骼肌表型差异提供了重要线索,并为研究器官的尺寸控制奠定了一定基础。通过分析蛋鸡、肉鸡的成肌细胞总蛋白双向电泳结果,发现8个在蛋鸡和肉鸡成肌细胞中表达明显差异的蛋白;而且,其表达水平均为肉鸡高于蛋鸡。通过LCESI质谱分析鉴定,这些差异表达蛋白分别是OXCT1 protein; capping protein(actin filament) muscle Z-line, alpha 2; PREDICTED: similar to Rbm6 protein; PREDICTED: similar to prohibitin [Gallus gallus]; tumor protein, translationally-controlled 1; acidic ribosomal phosphoprotein; PREDICTED: similar to Dihydroxyacetone;以及phosphate acyltransferase (DHAP)。以Real-Time PCR验证上述双向电泳方法获得的差异表达蛋白在mRNA水平上的表达差异,结果显示其中的4个蛋白:OXCT1 protein; PREDICTED: similar to Rbm6 protein; PREDICTED: similar to calmodulin-like 4和tumor protein,translationally-controlled 1,其mRNA水平也是肉鸡中的表达高于蛋鸡。OXCT1,即琥珀酰辅酶A转移酶(3-oxoacid CoA transferase 1),是酮体代谢的关键酶,可以分解酮体为骨骼肌、心肌和肾脏等肝外组织提供能量,考虑到细胞的增殖与代谢状态之间存在着密切的相关性,我们推测OXCT1的表达差异可能与蛋鸡、肉鸡骨骼肌生长发育差异有关,所以在后续实验中主要研究了OXCT1的功能。我们通过原核表达、纯化鸡OXCT1蛋白并免疫小鼠,已经获得了可特异性识别鸡OXCT1的抗体。通过Real-Time PCR、Western blot和酶活性分析等不同检测手段,研究了在蛋鸡、肉鸡不同发育阶段的骨骼肌组织中,OXCT1在mRNA水平、蛋白水平及酶活性水平的差异,结果发现,肉鸡骨骼肌中的OXCT1水平均明显、而且持续地高于蛋鸡,这些结果均强烈支持OXCT1与蛋鸡、肉鸡之间显著的表型差异之间存在着明确的相关性。细胞的增殖、分化过程都需要依赖于代谢所提供的能量和底物,考虑到OXCT1在代谢调节中的重要地位,推测其可能通过促进成肌细胞增殖与分化、或骨骼肌蛋白质合成来参与肌肉肥大的调节。我们进一步检测了蛋鸡、肉鸡不同发育阶段血清中的OXCT1的底物,3-羟基丁酸(3-hydroxybutyrate,3-HB)的水平差异(3-HB是酮体的三大组成部分之一,其水平可直接反映酮体水平),结果发现:成年肉鸡血清中的3-HB水平确实高于蛋鸡;但是,在胚胎期肉鸡的血清3-HB水平却明显低于蛋鸡,与肉鸡骨骼肌OXCT1水平的持续增高并不一致,这提示肉鸡出生之前的酮体利用可能多于蛋鸡。通过在蛋鸡成肌细胞过表达OXCT1,以及对肉鸡成肌细胞中的OXCT1进行RNAi,来观察OXCT1表达变化对这两种成肌细细胞表型的影响。虽然OXCT1过表达或RNAi时并未观察到对这两种细胞表型有明显影响,但以流式细胞术(FACS)进一步分析了OXCT1表达差异对细胞周期的影响,结果提示OXCT1过表达可以促进细胞DNA合成。本研究结果表明,对于寻找蛋鸡与肉鸡成肌细胞差异表达基因,以双向电泳为基础的蛋白组学分析是一种行之有效的方法。更为重要的是,我们关于OXCT1的实验结果为细胞的增殖、分化过程与细胞的代谢状态之间建立了密切的联系,也为进一步阐明蛋鸡和肉鸡骨骼肌生长差异提供了重要的线索,也为研究器官的尺寸控制奠定一定基础。