蛋鸡肉鸡成肌细胞差异蛋白鉴定及OXCT1基因功能的初步探讨

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhefen
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究肌肉发生对于理解动物生长发育过程具有重要意义。蛋鸡和肉鸡是长期选育过程中形成的两大品系,它们在骨骼肌生长速率上存在显著差异。本研究以蛋鸡和肉鸡的肌肉发生为模型,分离蛋鸡、肉鸡的成肌细胞,采用双向电泳(2-D)的方法寻找在肉鸡和蛋鸡成肌细胞中差异表达的基因,并对发现的差异基因进行初步功能研究,为解释蛋鸡、肉鸡的骨骼肌表型差异提供了重要线索,并为研究器官的尺寸控制奠定了一定基础。通过分析蛋鸡、肉鸡的成肌细胞总蛋白双向电泳结果,发现8个在蛋鸡和肉鸡成肌细胞中表达明显差异的蛋白;而且,其表达水平均为肉鸡高于蛋鸡。通过LCESI质谱分析鉴定,这些差异表达蛋白分别是OXCT1 protein; capping protein(actin filament) muscle Z-line, alpha 2; PREDICTED: similar to Rbm6 protein; PREDICTED: similar to prohibitin [Gallus gallus]; tumor protein, translationally-controlled 1; acidic ribosomal phosphoprotein; PREDICTED: similar to Dihydroxyacetone;以及phosphate acyltransferase (DHAP)。以Real-Time PCR验证上述双向电泳方法获得的差异表达蛋白在mRNA水平上的表达差异,结果显示其中的4个蛋白:OXCT1 protein; PREDICTED: similar to Rbm6 protein; PREDICTED: similar to calmodulin-like 4和tumor protein,translationally-controlled 1,其mRNA水平也是肉鸡中的表达高于蛋鸡。OXCT1,即琥珀酰辅酶A转移酶(3-oxoacid CoA transferase 1),是酮体代谢的关键酶,可以分解酮体为骨骼肌、心肌和肾脏等肝外组织提供能量,考虑到细胞的增殖与代谢状态之间存在着密切的相关性,我们推测OXCT1的表达差异可能与蛋鸡、肉鸡骨骼肌生长发育差异有关,所以在后续实验中主要研究了OXCT1的功能。我们通过原核表达、纯化鸡OXCT1蛋白并免疫小鼠,已经获得了可特异性识别鸡OXCT1的抗体。通过Real-Time PCR、Western blot和酶活性分析等不同检测手段,研究了在蛋鸡、肉鸡不同发育阶段的骨骼肌组织中,OXCT1在mRNA水平、蛋白水平及酶活性水平的差异,结果发现,肉鸡骨骼肌中的OXCT1水平均明显、而且持续地高于蛋鸡,这些结果均强烈支持OXCT1与蛋鸡、肉鸡之间显著的表型差异之间存在着明确的相关性。细胞的增殖、分化过程都需要依赖于代谢所提供的能量和底物,考虑到OXCT1在代谢调节中的重要地位,推测其可能通过促进成肌细胞增殖与分化、或骨骼肌蛋白质合成来参与肌肉肥大的调节。我们进一步检测了蛋鸡、肉鸡不同发育阶段血清中的OXCT1的底物,3-羟基丁酸(3-hydroxybutyrate,3-HB)的水平差异(3-HB是酮体的三大组成部分之一,其水平可直接反映酮体水平),结果发现:成年肉鸡血清中的3-HB水平确实高于蛋鸡;但是,在胚胎期肉鸡的血清3-HB水平却明显低于蛋鸡,与肉鸡骨骼肌OXCT1水平的持续增高并不一致,这提示肉鸡出生之前的酮体利用可能多于蛋鸡。通过在蛋鸡成肌细胞过表达OXCT1,以及对肉鸡成肌细胞中的OXCT1进行RNAi,来观察OXCT1表达变化对这两种成肌细细胞表型的影响。虽然OXCT1过表达或RNAi时并未观察到对这两种细胞表型有明显影响,但以流式细胞术(FACS)进一步分析了OXCT1表达差异对细胞周期的影响,结果提示OXCT1过表达可以促进细胞DNA合成。本研究结果表明,对于寻找蛋鸡与肉鸡成肌细胞差异表达基因,以双向电泳为基础的蛋白组学分析是一种行之有效的方法。更为重要的是,我们关于OXCT1的实验结果为细胞的增殖、分化过程与细胞的代谢状态之间建立了密切的联系,也为进一步阐明蛋鸡和肉鸡骨骼肌生长差异提供了重要的线索,也为研究器官的尺寸控制奠定一定基础。
其他文献
甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)是甲型副伤寒(paratyphoid fever A)的病原菌,主要通过粪-口途径传播,感染剂量约为103~109CFU/人,能够引起类似伤寒样的临床症
本论文以苜蓿和大豆为实验材料(选用的苜蓿品种为越冬之星、凯撒,大豆品种为黑农38和绥农14),研究了干旱和盐胁迫条件下苜蓿和大豆叶片中葫芦巴碱、脯氨酸、可溶性糖、水势、渗
本研究课题来源于安徽省省长专项基金资助项目(y47)——无公害果蔬害虫综合治理技术及推广应用,力求在分析安徽省和县蔬菜科技示范园的菜用大豆田节肢动物群落结构和组织水平的
1优势产区介绍——湖南麻阳无籽西瓜优势产区麻阳县位于湖南怀化西北,作为武陵山片区的国家区域发展与扶贫攻坚试点县,以其在湘西独特的区位和生态优势,20世纪90年代与黔东南
DNA与小分子之间的相互作用是当前核酸研究的热点之一,它在遗传学,药物设计,药理学等方面有着广泛的应用前景。对苯二胺(PPD)是氧化型染发剂的主要成分,其是否存在危害尚未达成共
细胞分化与去分化是生命科学领域中的一个研究热点,对其机制的研究为肿瘤的发生及防治提供重要依据。哺乳类红系细胞的分化具有明显的时序性变化,当细胞进入终末分化时出现:
摘要:转化思想作为数学教学中重要的一种数学思想,是指教师根据相同的数学知识、数学问题从另一个角度切入、另一种语言表达、另一种思维思考,使数学知识学习颇为变幻莫测。这种转化思想运用在数学教学中,不仅提升了数学教学的趣味性、生动性,为学生营造良好的教学氛围,也使学生充分调动自己的思绪,积极思考数学知识和数学问题,培养学生多角度思考问题、多层次看待问题、多方式解决问题的能力,从而促进学生长远发展。本文特
2006年“大明永乐年施”铭款释迦牟尼火焰背光金佛在香港苏富比拍卖行以1 23亿元成交,成为当时世界范围内最贵的佛像。2013年10月8日香港苏富比明永乐鎏金铜释迦牟尼佛以2.36
栓皮栎(Quercus variabilis),属壳斗科(Fagaceae),栎属(Quercus),是我国比较重要的造林树种之一。而影响植物生长发育的重要的环境因子是温度。跟着全世界气温的不断提升,对
喜树碱(Camptothecin,CPT)是我国特有树种喜树(Camptotheca acuminata Descne.)中的一种有独特抗癌活性的单萜吲哚类生物碱。水杨酸(salicylic acid,SA)是植物生化防御系统中一种重要的信号分子。本文在探讨了提取植物中SA最佳条件的基础上,将SA以喷洒叶片和灌根两种方式施于喜树幼苗,通过高效液相色谱测定内源SA含量和喜树碱含量的动态变化,得到了以