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目的本文旨在研究当细胞内环境呈酸化改变时，细胞内β-分泌酶mRNA表达、蛋白含量及活性的变化，进而说明细胞内pH值变化与β-分泌酶的关系。方法培养人神经母细胞瘤细胞（Human neuroblastoma cell line, SH-SY5Y），将构建好的靶向人NHE-1基因的siRNA腺病毒及腺病毒空载体感染SH-SY5Y细胞，建立NHE-1基因敲低细胞模型及负对照组；用配制好的无血清的培养基培养SH-SY5Y细胞，收集前5天培养的细胞，建立无血清培养组。实验分成4组，即正常对照组、NHE-1基因敲低组、负对照组和无血清培养组。运用荧光分光光度计测定各组细胞内pH值，采用Real-time PCR技术检测各组细胞内β-分泌酶mRNA表达，通过Western Blotting检测β-分泌酶蛋白表达水平，通过ELISA检测β-分泌酶的活性变化。利用单因素方差分析及LSD-t检验统计分析各组细胞的检测指标差异情况。结果无血清条件下培养细胞，当培养4天时细胞状态最佳。荧光探针法测得NHE-1基因敲低组细胞内pH值为6.91±0.055，无血清培养组细胞内pH值为7.03±0.062，负对照组胞内pH值为7.22±0.026，正常对照组细胞内pH值为7.19±0.066，与正常对照组和负对照组相比，NHE-1基因敲低组和无血清培养组细胞内pH值明显降低，差异具有统计学意义（p<0.05），而正常对照组和负对照组相比细胞内pH值无明显变化，差异无统计学意义（p>0.05）。Real-time PCR及Western Blotting结果显示：NHE-1基因敲低组细胞内β-分泌酶mRNA表达和蛋白含量分别为5.65±0.33和0.37±0.030，无血清培养组细胞内β-分泌酶mRNA表达和蛋白含量分别为2.40±0.55和0.32±0.031，与正常对照组（0.92±0.34；0.12±0.020）和负对照组（1.00±0.00；0.14±0.021）相比，NHE-1基因敲低组和无血清培养组细胞内β-分泌酶mRNA表达和蛋白含量明显增多，差异具有统计学意义（p<0.05），而正常对照组和负对照组相比细胞内β-分泌酶mRNA表达和蛋白含量无明显变化，差异无统计学意义（p>0.05）。ELISA结果显示：NHE-1基因敲低组细胞内β-分泌酶的蛋白水平为449.45±65.95ng/L，无血清培养组细胞内β-分泌酶的蛋白水平为468.60±58.59ng/L，与正常对照组（290.65±82.33ng/L）和负对照组（327.11±82.32ng/L）相比，NHE-1基因敲低组和无血清培养组细胞内β-分泌酶的活性明显增强，差异具有统计学意义（p<0.05），而正常对照组和负对照组相比细胞内β-分泌酶的活性无明显变化，差异无统计学意义（p>0.05）。结论通过成功构建NHE-1基因敲低组及无血清培养组，使细胞内环境呈酸化改变，证实细胞内pH降低能够使β-分泌酶的表达上调并增强其活性，进而可能影响APP水解剪切，促进Aβ的生成积聚。