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1.研究目的
(1)应用高分辨熔解曲线分析(HRMA)技术对弥漫型大B细胞淋巴瘤(DLBCL)相关基因（MYD88、EZH2、MEF2B、IDH1和IDH2）进行突变扫描，建立一种快速、敏感、精确、可靠的突变分子诊断平台。
(2)初步探讨这些基因突变与该疾病发病的临床相关性。
2.研究方法
(1)临床病例收集、组织标本及DNA提取:收集按世界卫生组织(WHO)和修正的欧美淋巴瘤(FEAL)标准诊断的初诊DLBCL120例，经免疫组化分类为生发中心B细胞样(GCB)（22例，18.3％）亚型和非生发中心B细胞样(ABC)（98例，81.7％）亚型，组织标本经福尔马林固定和石蜡包埋，基因组DNA按照凯杰石蜡组织DNA提取试剂盒说明进行提取。
(2)聚合酶链式反应(PCR)扩增:根据各基因（包括MYD88、EZH2、MEF2B、IDH1和IDH2）的常见突变位点设置引物及建立相应的PCR扩增反应体系，在ABI7300 PCR扩增仪上对各基因片段进行扩增。
(3) HRMA检测:将带有荧光的PCR扩增产物在LightScanner分析仪上扫描，分析软件监测并记录产物熔解曲线、熔解峰、差异曲线，经过分析处理后若存在基因变异体且经测序鉴定为突变序列，则进一步评估HRMA检测该基因突变的灵敏度，最后检测出待测标本中各基因的突变情况。
(4) DNA测序:经HRMA扫描出的变异体均需测序进行鉴定，并评估DNA测序检测不同基因突变的灵敏度。
(5)突变的临床意义分析:Spearman秩和相关检验分析突变与免疫组化分型、年龄、性别、临床分期等的相关性;卡方检验及Fisher确切检验分析突变患者和无突变患者之间的分类变量（如性别、临床分期、免疫组化分型）的差异性，应用Mann-Whitney U检验比较突变患者和无突变患者之间的连续变量（如年龄）的差异性。p值在以上分析中均设置为双侧分布，以小于0.05为有统计学意义。
3.研究结果
(1) MYD88 L265P突变:
①HRMA检测MYD88 L265P突变的灵敏度达5％，高于DNA测序的灵敏度(25％);
②对120例DLBCL患者检测发现11例(9.2％)存在MYD88基因杂合子突变，进一步测序证实发现11例均为c.794T＞C(CTG→CCG)突变;11例MYD88均发生于ABC亚型;MYD88突变和患者的免疫组化分型、年龄，性别、临床分期无明显相关性，突变阳性组和无突变组之间在免疫组化分型、性别、分期中也无显著差异性;通过比较以往多种突变的检测方法，HRMA方法能快速、敏感、精确、可靠的筛选出大量标本中的突变体，为进一步鉴定基因突变的功能提供可靠的分子基础。
(2) EZH2突变:未检测到突变。
(3) MEF2B突变:未检测到突变。
(4) IDH1、IDH2突变:未检测到突变。
4.结论
(1) HRMA是新型检测基因突变的一个高通量筛选技术，具有灵敏度高、特异性好、结果可靠、成本低廉等优点，可有效用于对大批量标本进行基因突变的筛选和鉴定。
(2)中国人群DLBCL患者中存在MYD88基因突变，均为杂合子突变，经测序证实为c.794T＞C(CTG→CCG)突变，主要发生于ABC亚型患者。
(3)中国人群DLBCL患者120例均未检测到存在EZH2突变、MEF2B突变、IDH1/IDH2突变。