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目的：观察MM—MV形态、免疫表型；探讨分离MSCs方法；证实MV与MSCs相互作用。方法：应用透射电镜观察MV大小、形态：流式细胞仪检测MV免疫表型特征。采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期及免疫表型。激光共聚焦显微镜及流式细胞仪证实MM-MV与MSC作用。结果：MV表达母体细胞表面标志CD138,电镜下见大小不一,0.3～1gm之间的囊泡结构。传代后的MSCs形态均一,呈成纤维细胞样；第三代MSCs CD90、CDl3、CDl05、 CD44阳性,CD34. CD45、 CDl4阴性；96.47%细胞处于G0/G1期。MSCs在2h内即摄取、内化MM-Mv；MV传递CDl38,MSCs表型部分转化。结论：MM细胞释放CD138阳性MV；全骨髓贴壁法体外分离培养MSCs简便、经济、高效；MV为MM细胞与MSCs新作用途径。目的：探讨MM-MV对MSCs成骨分化作用。方法：ALP、茜素红染色观察CFU-Fs、 CFU-OB; MTT法检测MV与MSCs共培养24-72h对MSCs增殖影响；FCM检测MV与MSCs共培养两周对细胞凋亡影响；Quantitative real time RT-PCR检测共培养d3、 d6RUNX2及骨标志基因AL、 osteocalcin、 collagen ⅠmRNA表达；Elisa法检测培养上清中骨钙蛋白水平；ALP活性试剂盒检测培养上清中ALP活性。结果：①8226、U266上清、条件上清抑制CFU-F形成,但条件上清的抑制作用弱于上清(P<0.05)；KM3上清抑制CFU-F形成,而KM3条件上清无抑制作用(P<0.05、P>0.05)；KM3上清抑制CFU-OB形成,条件上清对CFU-OB无抑制作用(P<0.01、P>0.05)。②50-100ng/ml MM-MV对MSCs无增殖、凋亡作用。③8226、U266、KM3MV抑制CFU-F形成(P<0.01、 P<0.05、 P<0.05), K562MV无抑制作用(P>0.05)；8226、 U266、 KM3MV显著抑制CFU-OB形成(P<0.01),8226MV作用强于U266MV (P<0.05)；而K562MV无作用。④诱导d3,d6MV下调osteocalcin mRNA表达(P<0.01)；诱导d6, MM-MV下调RUNX2mRNA表达,K562MV无作用；U266、KM3MV抑制ALP mRNA表达；U266MV抑制Collagen Ⅰ mRNA表达。⑤诱导d6, U266MV抑制骨钙蛋白分泌(P<0.05)；d9,d12骨钙蛋白分泌显著受抑(P<0.01)。⑥诱导d6,8226、 KM3MV抑制ALP活性(P<0.01、P<0.05)；诱导d12,MV组ALP活性均减低,以8226MV作用最为显著(P<0.01)。结论：MM-MV抑制MSCs成骨分化目的：MM-MV抑制MSCs成骨分化机制研究方法：Western blot法检测MM细胞、MM-MV内DKK-1、 sFRP2、 IL-7的表达。ALP染色法观察IL-7中和抗体对U266、 KM3MV成骨抑制的阻断效应。Western blot法检测RUNX2蛋白、β-catenin、磷酸化及去磷酸化水平。ELISA法检测RUNX2活性。结果：①MM-MV选择性包装成骨抑制因子sFRP2、 IL-7。8226、 KM3细胞表达DKKl而其MV不表达；8226、 U266、 KM3细胞不表达sFRP2,而8226MV、 KM3MV表达；8226、U266、KM3细胞均表达IL-7,表达强弱顺序依次为KM3、8226、U266,而MV内IL-7表达却相反,U266MV浓缩表达IL-7,高于其母体细胞,而8226MV内IL-7表达低于细胞,KM3MV表达量极低。②IL-7中和抗体阻断U266MV成骨抑制效应(P<0.05),对KM3MV无阻断作用(P>0.05)。③8226、U266MV抑制RUNX2蛋白表达及活性。④MM-MV作用一周后,MSCs胞浆内磷酸化β-catenin蛋白水平明显升高；8226、KM3MV导致胞浆β-catenin磷酸化强于U266MV,与MV内sFRP2表达水平基本一致。结论：MV成骨抑制作用取决于其包装的分子内容物。8226MV表达IL-7、 sFRP2,通过Wnt/β-catenin及RUNX2双通路作用MSCs,成骨抑制最强；U266MV主要经IL-7抑制RUNX2活性,KM3MV经sFRP2作用Wnt通路,成骨抑制弱于8226MV。