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肠上皮是实现肠道消化、免疫、内分泌等功能的主要组织细胞，也是构筑肠道粘膜屏障的主要成分，同时它对辐射敏感。作为腹腔恶性肿瘤治疗主要手段之一，电离辐射对正常小肠上皮细胞具有毒副作用，限制了其在治疗上的应用。超过一定剂量照射可形成的肠型放射病，导致病死率极高，故对辐射诱导的小肠上皮损伤的研究受到极大的关注。为深入阐明电离辐射致肠上皮损伤的分子机制，寻找促进肠上皮损伤修复和具有辐射保护作用的蛋白质，本研究以离体培养的IEC-6细胞（正常大鼠空肠上皮细胞）和小鼠9Gyγ-射线全身照射所致肠型放射病为模型，采用双向电泳技术分别比较了IEC-6细胞和小鼠小肠上皮细胞照射前后蛋白质表达的差异，通过MALDI-TOF-MS鉴定双向电泳图谱上差异的蛋白质点，采用Western blot和RT-PCR技术进行了部分验证，并集中研究了两个差异蛋白质PrxI和ERP29在电离辐射中的作用。取得了如下的主要结果：一、 损伤模型的确定利用IEC-6细胞作为体外研究模型是合理可行的。首先根据IEC-6细胞在不同照射剂量照射（15-35Gy）和照射后不同时相（1-3d）细胞增殖以及细胞凋亡量来确定合适的照射剂量。结果显示：利用25Gy照射后1天的细胞来研究细胞对电离辐射的反应是较为适合的。体内研究是以肠型放射病为模型。采用不同剂量的γ-射线（7-10Gy）全身照射小鼠，复制肠型放射病模型。结果表明：9Gy照射可导致小鼠出现典型的肠型放射病。9Gy照射3h后，小肠上皮隐窝高度和绒毛高度未见明显缩短，但细胞核分裂相消失，呈严重的损伤性改变；照射后72h，绒毛明显缩短，隐窝明显增高，表明有大量再生上皮细胞，以增殖修复为主。因此，该条件下小鼠能存活一定时间，其早期辐射损伤严重，后期修复明显，是较为适合的研究模型。利用含尿素的细胞裂解液能够较为完全地提取细胞的总蛋白，适合双向电泳制备蛋白样品的要求。二、 IEC-6细胞照射前后蛋白质表达谱的差异采用宽pH范围3-10L的干胶条（IPG、18cm），上样量为500-1000(g，聚焦6-8h，千伏时不低于32000。各选取3张照射前后的蛋白图谱，应用PDQUEST软件进行图像分析，在pH3-10L和Mr 14000-97400Da范围内检测蛋白。电泳图像经过PDQuest处理后，结果表明：在正常IEC-6细胞中检测到608±40个蛋白点，细胞照射后的样<WP=9>品中检测到595±31个蛋白点，其中匹配的蛋白点为396个，电泳图谱的相关系数为0.78。然后，选择了部分差异明显的蛋白点进行肽质量指纹图谱鉴定。在未匹配的蛋白点中选择清晰、较浓的点做好标记，从凝胶上准确切割后进行脱色、酶解、肽片段提取，并测定肽质量指纹图谱。根据质谱图中的肽片段质量进行检索，再结合双向电泳中蛋白点的表观分子量、等电点进行综合分析。本实验共对16个蛋白点进行了肽质量指纹图谱分析，其中11个蛋白点得到相应的蛋白质，这包括一些与代谢、自由基清除、细胞骨架相关的蛋白。其中，电离辐射后降低的蛋白质包括：STRESS-70 PROTEIN，Tubulin beta-5 chain，ATP SYNTHASE BETA CHAIN，Vimentin，PDZ and LIM domain protein 1等；而PEROXIREDOXIN 1，ERP29，Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase，RGS4，Aldehyde dehydro- genase（mitochondrial precursor）等在照射后升高。在此基础上，对其中部分蛋白质进行了验证。Western blot结果显示：STRESS-70 PROTEIN在照射后确实被降低了。RT-PCR结果显示：ERP29基因在照射后基因表达增高，这与其蛋白质在照射后升高相吻合。三、 小鼠全身照射前后小肠上皮细胞蛋白质表达谱的差异在9Gy的剂量照射后，分离小肠上皮细胞，并采用Percoil细胞分离液对上皮细胞进行了纯化，得到相对较为单纯的肠上皮细胞。利用含尿素的细胞裂解液提取细胞的总蛋白，对同一样品进行多次电泳。总蛋白的分布模式非常相似：蛋白质斑点相对集中于pH4~7，极端酸性蛋白与碱性蛋白数量较少；蛋白质相对分子质量集中于（15~100）×103，超出此范围的斑点较少。采用PDQuest软件比较各组图谱，在正常对照组、照射后3h组以及照射后72h组分别检测到638±39、566±32和591±29个蛋白质点，总蛋白质点在照射后有所减少。照射后3h组与正常对照组相比有360个点相匹配，电泳图谱的平均相关系数为0.78；照射后72h组与正常对照组相比有312个点相匹配，电泳图谱的平均相关系数为0.82；照后3h组与照后72h组相比有282个相匹配，电泳图谱的平均相关系数为0.76。不匹配的斑点主要为低丰度蛋白质。在差异的蛋白点中选择清晰、较浓的点做好标记，从凝胶上准确切割后进行脱色、酶解、肽片段的提取，并测定肽质量指纹图谱。根据肽质量指纹图中肽片段的质量数进行检索，再结合蛋白质点的表观分子量、进行综合分析。共对28个蛋白点进行了肽质量指纹图谱分析，19个蛋白点得到相应的蛋白质，这包括一些与代谢、过氧化应急、信号转导相关的蛋白。其中，电离辐射后降低的蛋白质包括：Transforming protein RhoB，Antioxidant Protein 2，Q8VC72，O70619等；而PEROXI- REDOXIN 1，ERP29，Rho GDP-dissociation inhibitor 1，Alpha enolase，Prolactin receptor precursor，Glutathione S-transferase P2，Truncated