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人工关节置换术是骨科治疗关节疾病的常用方法之一,其主要并发症之一就是人工关节松动。术后早期提高假体界面直接骨结合的速度和程度可以使患肢早期负重,并减少人工假体术后松动发生率。 目的 体外培养兔骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC_s),并验证其成骨潜能,然后使其在金属植入体表面粘附,并在成骨诱导剂的诱导下,向成骨细胞转化,在金属植入体表面形成与之结合牢固的组织工程化骨,植入动物体内,对照没有任何处理的金属植入体和表面黏附rhBMP-2的金属植入体,一定时期后对比表面附着组织工程化骨的金属植入体在骨结合率以及假体与骨之间的最大剪切力等方面是否优于其它植入体。 方法 实验组:抽取兔骨髓血,体外分离,扩增BMSC_s,传代后,黏附于金属体表面,成骨诱导,在PCA、PCA+HA表面形成组织工程化骨。对照组:PCA、PCA+HA、PCA+BMP-2。植入动物硕士论文军医进修学院体内,一定时期后(4,8周)处死动物,取出假体,通过X线摄片、不脱钙骨组织磨片、扫描电镜、骨组织计量学分析及生物力学测定等方法对骨一植入体界面的骨长入及界面的结合强度进行了比较分析。 结果 一、细胞培养: 1、原代BMSCs3一4d贴壁,形态由圆形或椭圆形逐渐转变为短梭形,进而变为长梭形,胞浆丰满,呈现集落生长。 2、BMSCs传代后,1 Zh基本完成贴壁,细胞形态呈长梭形,与原代后期无明显差别。细胞生长均匀,生长迅速,无钙化结节形成。 3、成骨诱导后,细胞形态由长梭形变为多角形,细胞体内ALP活性显著增高。约诱导两周后,出现钙结节(四环素荧光染色阳性)。MTT法显示,诱导后和未诱导千细胞的生长曲线无明显差异。 4、种植后6d,环境扫描电镜显示,干细胞私附植入体良好。 二、动物实验: 1、五种植入体在植入体内后4周后,不脱钙骨组织磨片观察显示骨组织不同程度地长入金属体界面及孔隙中,图像分析表明4周时PCA+BMSC、组新生骨结合率为4 6.05士5.74,PCA+HA+BMSCs新生骨结合率为47.94幼.66,两组骨形成率明显高于PCA组2 6.30士4.12、PCA+HA组31.52士4.85、PCA+BMP组37.67到.82,方差分析及相邻组间两两比较显示实验组与其它各组间均有著差异。 2、五种植入体在植入体内后8周后,各组骨结合率均升硕士论文军医进修学院高,实验组与对照组无显著性差异. 3、Push一out(推出)实验显示4周时,实验组剪切力PCA+BMSC:2 0.16土2.07Mpa,PCA+HA+BMSCs 23.84士4.61,均高于对照组PCA 8 .30士2.21MPa,PCA+HA 10.87士3.58Mpa,PCA+BMP巧.23士1.74MPa,有显著差异.8周时,各种植入体界面剪切强度上升,但各组之间差异无显著性。 结论1、BMSCs在钻铬铂合金上生长良好,无毒性反应。2、经成骨诱导后,BMSCs向成骨细胞方向发展,且有钙化结 节出现。3、金属植入体加入BMSCs后可以促进成骨,早期使骨长入假 体界面中,从而可以提早达到生物固定。