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京尼平(Genipin)是一种环烯醚萜类物质,具有重要的药理价值,可用于抗炎、治疗肝脏疾病、抗脂质过氧化。京尼平还是一种优良的生物交联剂,在生物材料领域被广泛应用。但京尼平在自然界含量很低(栀子中大约为0.005%-0.01%),而它的糖苷-京尼平苷含量很高(栀子中大约为3%-8%)。目前京尼平的制备一般采用p-葡萄糖苷酶水解分离自栀子中的京尼平苷。然而该法成本较高、工艺繁琐、大规模应用受到限制。本文利用微生物转化法直接将栀子药材中的京尼平苷转化为京尼平,并对转化过程中的京尼平苷水解酶和转化产物分离纯化工艺进行了研究、同时对分离得到的京尼平苷水解酶进行了酶学性质的研究。首先,筛选到一株高效转化栀子中京尼平苷为京尼平的微生物-哈茨木霉,对哈茨木霉转化栀子的发酵培养条件进行优化,以京尼平产量为优化目标,最适的摇瓶培养温度为30℃,培养基最佳药材载量80g/L,培养基以1/15M、pH7.0的Na2HPO4-KH2PO4为基质,最佳发酵时间48h。在优化条件下,京尼平苷转化率达97.9%。在摇瓶基础上,进行批式发酵工艺的优化。结果表明,在温度为30℃,转速250rpm,通气速度3vvm下发酵40h,京尼平苷转化率达52%。其次,通过DEAE阴离子柱层析、Superdex200凝胶柱层析两步从栀子发酵液中纯化出京尼平苷水解酶,SDS-PAGE分析呈单一条带,MALDI/TOL质谱分析显示该酶的分子量为74.4kDa。以京尼平苷为底物,该酶最适pH为4.0-5.0,最适温度为50℃；在最适条件下,Km值为4.02mM,Vmax值为813μmol(h mg protein)-1。该酶不能水解来源于盾叶薯蓣的甾体皂苷,涉及α-鼠李糖苷键、1-3和1-4葡聚糖苷键以及以连接在薯蓣皂苷元末端的单葡萄糖苷键,但该酶对京尼平苷和pNPG表现出很强的水解能力。最后,采用双水相提取、大孔树脂结合硅胶柱层析从栀子发酵液中分离纯化京尼平。双水相条件优化研究表明,采用28%正丁醇,15%硫酸铵对发酵液进行提取,京尼平得率最高。大孔树脂研究表明,发酵液调至pH4.0时,XAD16N对京尼平的静态吸附率最高,达到90.6%,大孔树脂的动态吸附量为3.1mg/g树脂。硅胶柱层析洗脱条件为83%氯仿17%甲醇等度洗脱时,京尼平能够得到有效分离。采用双水相萃取偶合大孔树脂、硅胶柱层析获得的结晶产物HPLC纯度达98%以上,经LC/Q-T of MS、NMR鉴定为京尼平。