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背景肥胖症（obesity）是体内脂肪分布过多和（或）分布异常所引起的慢性代谢性疾病。肥胖症与高血压、冠心病、2型糖尿病、血脂异常、睡眠呼吸暂停等多种疾病的发生密切相关。国际肥胖特别工作组（TOTF）指出,肥胖将成为新世纪威胁人类健康和生活质量的最大杀手。因此,积极防治肥胖对于改善人类健康和提升生活质量至关重要。小檗碱（Berberine,BBR）是从黄连中提取的一种异喹啉生物碱,其价格便宜、毒副作用小,同时具有抗炎、抗氧化、降血糖、降血脂等多种药理作用,是治疗肥胖和糖尿病及其并发症的一种有潜力的药物。胰升糖素样肽1（Glucagon-Like Peptide-1,GLP-1）主要由肠道L细胞产生,具有抑制食欲、减轻体重、促进胰岛素分泌、刺激胰岛β细胞新生与增殖等作用,在肥胖和2型糖尿病的治疗中发挥重要作用。既往研究发现,BBR通过促进肠道L细胞GLP-1的合成和分泌发挥降血糖、降血脂作用,然而其具体机制尚不清楚。微小RNAs（microRNAs,miRNAs）是一类非编码小RNA,其可与靶基因mRNA 3’端非翻译区（3’-untranslatedregion,3’UTR）结合,通过促进 mRNA 降解或阻断蛋白翻译调控靶基因表达,从而调控机体病理生理过程。研究发现,miR-106b通过激活Wnt/β-catenin通路介导肝细胞癌增殖。BBR通过下调miR-106b抑制糖尿病小鼠胰岛β细胞的氧化应激反应,进而延缓糖尿病进展。有研究显示,β-catenin/TCF4通路在肠道L细胞GLP-1分泌的过程中发挥重要作用。本课题组采用生物信息学软件分析发现,在肠道L细胞株（STC-1细胞）中,miR-106b与TCF4的3’UTR区域存在结合位点。因此,本研究推测,BBR通过调控miR-106b/β-catenin/TCF4信号通路促进肠道L细胞GLP-1分泌,进而改善高脂饮食诱导肥胖小鼠（DIO小鼠）的糖脂代谢紊乱。目的探讨BBR对高脂饮食诱导肥胖小鼠小肠道L细胞GLP-1分泌的影响及其作用机制。方法1、体内实验:将8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为四组（n=10）:对照组（Con）、高脂饮食组（HFD）、小檗碱组（Berberine）和小檗碱+miR-106b过表达组（Berberine＆mimic）。Con组以普通饲料喂养12周;HFD组以高脂饲料喂养12周;Berberine组以高脂饲料喂养12周,同时从第5周开始经口服给药BBR（100 mg/kg/d）;Berberine＆mimic组以高脂饲料喂养12周,同时从第5周开始经口服给药BBR（100 mg/kg/d）,并通过腹腔注射miR-106b-mimic腺病毒（7.5 mg/kg）。分别于0、4、8、12周测定小鼠体重。12周后处死小鼠,取血清和结肠组织标本进行后续检测。检测小鼠血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）浓度。糖耐量试验（GTT）和胰岛素耐量试验（ITT）检测小鼠血浆葡萄糖水平。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清GLP-1和胰岛素水平。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测 miR-106b、TCF4 和 β-catenin mRNA 的表达水平。Western blot检测TCF4和β-catenin的蛋白水平。2.体外实验:将STC-1细胞分为空白对照组（Blank）、小檗碱组（Berberine,10OμM BBR）、si-NC 组（100μM BBR+si-NC 转染）、si-TCF4 组（100μM BBR+si-TCF4 转染）、Berberine＆mimic 组（100μM BBR+miR-106b mimic 转染）、mimic-NC 组（mimic-NC 转染）、miR-106b mimic 组（miR-106b mimic 转染）、inhibitor-NC 组（inhibitor-NC 转染）和 miR-106b inhibitor 组（miR-106b inhibitor转染）。qRT-PCR 检测 miR-106b、TCF4 和 β-cateninmRNA 的表达水平。Western blot检测TCF4和β-catenin的蛋白水平。ELISA检测GLP-1的产生水平。双荧光素酶报告基因检测评估miR-106b对TCF4荧光素酶活性的影响。甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测miR-106b的甲基化水平。结果（1）BBR 对 DIO 小鼠 GLP-1 产生以及 miR-106b、β-catenin 和 TCF4 表达的影响:与Con组相比,HFD组小鼠体重增加,血清TG、TC浓度和LDL-C/HDL-C比值升高,血浆葡萄糖和胰岛素水平升高,血清和结肠组织中GLP-1分泌水平降低,结肠组织中miR-106b表达水平升高、TCF4和β-catenin的mRNA和蛋白水平降低（均P＜0.05）。与HFD组相比,Berberine组小鼠体重降低,血清TG、TC浓度和LDL-C/HDL-C 比值降低,血浆葡萄糖水平和胰岛素水平降低,血清和结肠组织GLP-1分泌水平升高,结肠组织中miR-106b表达水平降低、TCF4和β-catenin的mRNA和蛋白水平升高（均P＜0.05）。Pearson相关性分析结果显示,小鼠结肠组织中TCF4与miR-106b表达呈负相关（r=-0.9087,P=0.0003）。（2）si-TCF4对BBR干预的STC-1细胞中GLP-1产生和miR-106b表达的影响:与Blank或si-NC组相比,si-TCF4组TCF4 mRNA表达水平显著下降（均P＜0.05）。与 Blank 组相比,Berberine 组 miR-106b 表达水平降低,TCF4 和 β-catenin的mRNA和蛋白表达水平升高,GLP-1分泌水平升高（均P＜0.05）。与Berberine组相比,si-TCF4组miR-106b的表达水平无明显变化（P＞0.05）,TCF4和β-catenin的mRNA和蛋白表达水平降低,GLP-1分泌水平降低（均P＜0.05）。（3）miR-106b过表达对BBR干预的STC-1细胞中GLP-1产生及TCF4和β-catenin 表达的影响:与 Blank 或 mimic-NC 组相比,miR-106b-mimic 组 miR-106b表达水平显著升高（P＜0.05）。与Blank组相比,Berberine组miR-106b表达水平降低,TCF4和β-catenin的mRNA和蛋白表达水平升高,GLP-1分泌水平升高（均 P＜0.05）。与 Berberine 组相比,Berberine＆mimic 组 miR-106b 表达水平升高,TCF4和β-catenin的mRNA和蛋白表达水平降低,GLP-1分泌水平降低（均P＜0.05）。（4）miR-106b 靶向调控 TCF4 的表达:与 mimic-NC 组相比,miR-106b-mimic组TCF4的mRNA和蛋白水平降低,β-catenin的蛋白水平降低（均P＜0.05）。与inhibitor-NC 组相比,miR-106b-inhibitor 组 TCF4 的 mRNA 和蛋白水平升高,β-catenin的蛋白水平升高（均P＜0.05）。生物信息学在线预测软件结果显示,miR-106b与TCF4的3UTR区域之间存在结合位点。双荧光素酶报告基因检测结果显示,在293T细胞中,与control组相比,miR-106b mimic和TCF4-WT共转染组TCF4-3’UTR的荧光素酶活性降低（P＜0.05）。与miR-106b和TCF4-WT共转染组相比,miR-106b mimic和TCF4-MUT共转染组荧光素酶活性升高（P＜0.05）。CpG岛生物信息学分析表明,miR-106b启动子区域存在CpG岛。MS-PCR结果显示,与Con组相比,Berberine组miR-106b的甲基化水平明显升高（P＜0.05）。（5）体内实验验证BBR通过调控miR-106b/β-catenin/TCF4信号通路促进肠L细胞GLP-1分泌:与HFD组相比,Berberine组小鼠体重减轻、血清TG、TC浓度和LDL-C/HDL-C比值降低,血浆葡萄糖和胰岛素水平降低,血清和结肠组织GLP-1分泌水平升高,结肠组织中miR-106b表达水平降低、TCF4和β-catenin 的 mRNA 和蛋白水平升高（均 P＜0.05）。与 Berberine 组相比,Berberine＆mimic组小鼠小鼠体重增加、血清TG、TC浓度和LDL-C/HDL-C比值升高,血浆葡萄糖和胰岛素水平升高,血清和结肠组织GLP-1分泌水平降低,结肠组织中miR-106b表达水平升高、TCF4和β-catenin的mRNA和蛋白水平降低（均P＜0.05）。结论BBR可能通过提高miR-106b的甲基化水平来抑制其表达,进而激活β-catenin/TCF4信号通路,促进肠道L细胞GLP-1分泌,改善DIO小鼠糖脂代谢紊乱。