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兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease，RHD)俗称兔瘟、兔出血热，是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)引起的一种急性、高度传染性、致死性、毁灭性传染病，给养兔业造成巨大的经济损失。1984年我国首先爆发兔出血症病毒病，目前呈全国性分布，直到2004年Genbank才登录了第一株中国株RHDV的全基因组序列JX/CHA/97，到2006年Genbank上共注册了4个中国株RHDV的全基因组序列。国内外报道有关RHDV分子流行病学的资料不多，且迄今国内对RHDV基因组序列测定的详细报道还是很少。本研究的主要目的，通过RT-PCR方法鉴定华南农业大学传染病教研室惠赠的疑似RHD的病死兔的肝脏组织，然后测定其全基因组序列，比较与其他10个毒株的异同，主要包括以下两个方面的内容：
1．兔出血症病毒GZ株的RT-PCR鉴定：本研究采用RT-PCR方法对华南农业大学传染病教研室惠赠的RHDV GZ株的病死兔的肝脏组织进行鉴定。首先将改病料经3月龄以上的成年兔体内传代复壮，直到第4代接种兔呈RHD典型性死亡，其临床症状、病理变化与兔病毒性出血症相似。然后无菌采集传第5代病死兔肝脏组织，加50％甘油保存于-20℃备用。最后参考Genbank上已登录的10株兔出血症病毒的全基因组序列，在一段相对保守区域设计一对RHDV特异的PCR引物，命名为P2；再对该病料进行RT-PCR扩增，结果扩增出与预期片段大小相符的PCR条带，对产物的克隆测序结果分析表明，该毒株与已报道的RHDV的对应区域的核苷酸同源性达87.5％～97.9％，氨基酸同源性更高达95.4％～100％，从分子水平证实本研究鉴定毒株为兔出血症病毒(RHDV)，将其命名为GZ株。
2．兔出血症病毒GZ株基因组序列的测定与分析：采用片段重叠的PCR方法获得了兔出血症病毒GZ株除5’和3’末端以外的6段内侧序列；参考《分子克隆实验技术》第三版，应用RACE原理设计引物，获得3’一末端非poly(A)区域的完整片段；采用TaKaRa公司生产的5’-Full RACE Core Set试剂盒，按其原理设计特异性引物获得了兔出血症病毒GZ株的5’末端完整序列。将各序列进行DNAStar软件分析和人工拼接后成功获得了兔出血症病毒GZ株的全基因组序列，全长为7437bp，与前人报道结果一致。将GZ株的全基因组序列与Gerlbank上已经公布的10株兔出血症病毒全基因组序列进行同源性比较分析发现，核苷酸同源性在89％～97.5％之间；ORF1同源性在88.8％～97.6％之间，编码氨基酸序列同源性达95.2％～98.7％；ORF2的核苷酸序列同源性在91.5％～97.5％之间，编码氨基酸序列同源性为94.1％～98.3％。采用DNASTAR分析软件进行的系统进化树分析，可以推论出：GZ株与Lowa2000株(AF258618)，JX/CHA/97(DQ205345)株、CD株(AY523410)和WHNRH株(DQ280493)株的亲缘关系较近，归入一个亚群。其余6株归入另一个亚群。