乳腺炎对奶牛的主要疾病之一,主要由病原微生物感染引起,给奶牛养殖业造成了巨大的经济损失。目前,缺少针对引起奶牛乳腺炎的主要病原菌的准确而快速的检测方法;尤其对目前奶牛乳腺炎的主要病原菌缺少分子流行病学资料;国内外还缺少预防奶牛乳腺炎效果较好的疫苗;我国众多奶牛散养户在顽固性乳腺炎面前束手无策等等,为探讨、解决以上问题,进行了本项研究。本研究分为三部分:第一部分:奶牛乳腺炎病原菌的分离鉴定对山东省济南、泰安、临沂三地区患乳腺炎的奶样进行病原菌分离鉴定。本研究结果表明由葡萄球菌、链球菌、肠杆菌引起的乳腺炎仍占主要地位,这对于奶牛乳腺炎的防治具有重要的指导意义。第二部分:应用PCR方法快速检测奶牛乳腺炎主要病原菌将PCR技术应用到奶牛乳腺炎病原菌的检测中去,建立一种在分子水平快速检测乳腺炎主要病原菌的方法。根据GenBank已发表的序列设计了三对特异性引物,可同时检测奶牛乳腺炎的三种主要病原菌:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,无乳链球菌。本方法的特异性为100%,敏感性检测的最低浓度为:1.25×103 cfu/ml。与传统检测方法相比本试验所建立的方法具有快速,准确和特异的优点。第三部分:金黄色葡萄球菌α溶血素的原核表达及其生物活性分析α溶血素(α-Hemolysin,α-HL)是金黄色葡萄球菌的主要毒力因子之一,利用PCR技术从金黄色葡萄球菌临床分离株扩增出编码α溶血素的基因(α-HL),经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达质粒pET32a+-α-HL。经诱导表达后,进行SDS-PAGE分析,结果表明:α-HL在大肠杆菌中已融合表达,融合蛋白的分子量为53kD。溶血实验证明该融合蛋白具有较强的溶血作用,其溶血效价达2.26×104 HU/mg,表明表达产物具有生物活性,这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件。