目的:Leber遗传性视神经病变(Leber hereditary optic neuropathy,LHON)是一种发生于视神经的退行性疾病。在中国汉族人群中,其主要与三种线粒体DNA(mtDNA)突变:m.3460G>A,m.11778G>A和m.14484T>C相关。尽管有几种方法可以对这些突变进行基因分型,如:SSCP-PCR、RFLP-PCR以及DNA测序等等,但由于费用昂贵、手续复杂、耗时长等因素,限制了其在临床推广使用。很少有针对LHON mtDNA三个突变位点的具备快速,低成本和易处理优势的定量方法的报道。因此,本研究诣在建立一种基于TaqMan小沟结合物(MGB)探针的荧光定量PCR(qPCR)方法,以对三个LHON mtDNA突变进行定性和定量分析。方法:1.针对中国汉族人群mtDNA的m.3460G>A,m.11778G>A和m.14484T>C 3个常见的突变位点分别构建相应的突变阳性对照标准品和阴性对照标准品。按照TaqMan-MGB探针qPCR引物探针设计原则分别针对LHON基因3种高频突变位点设计引物和探针。2.优化引物和探针比例,优化退火温度,建立起可以单管检测单/双/三重探针的扩增体系,并测试每种扩增体系的特异性,灵敏度,检出率,并建立标准曲线。3.收集LHON突变阳性标本3例(m.3460G>A 1例,m.11778G>A1例,m.14484T>C 1例)和突变阴性标本45例,用TaqMan-MGB探针qPCR验证其定性结果。将突变阳性对照标准品与正常基因组DNA样本混合,制成突变含量为5%~95%的模拟样本,用TaqMan-MGB探针qPCR进行定量检测,评价其检测突变异质性的能力。结果:1.成功构建了mtDNA m.3460G>A,m.11778G>A和m.14484T>C 3个位点的突变阳性参考标准品和突变阴性参考标准品并设计了TaqMan-MGB探针qPCR探针和引物。2.成功建立了检测mtDNA m.3460G>A,m.11778G>A和m.14484T>C 3个位点的TaqMan-MGB探针qPCR体系。3.成功检测出LHON突变阳性标本3例(m.3460G>A 1例,m.11778G>A 1例,m.14484T>C 1例)和突变阴性标本45例,并且可以较好地检测突变含量为5%~95%的模拟样本。结论:成功建立了一种新的基于TaqMan-MGB探针qPCR方法检测LHON的方法,这种方法具有良好的特异性,灵敏度和检出率,并且具有良好的临床应用效果,且兼备快速,低成本和易处理的优势。