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以新生血管为靶点对肿瘤进行生物治疗已成为近几年新的研究热点，与传统治疗手段相比，它具有广谱、特异的抗肿瘤作用，且毒副作用小，不易产生耐药性。血管生成素是新近发现的与血管生成及重塑密切相关的分子。本研究旨在克隆人血管生成素-1（Angiopoietin-1,Angl）编码基因的全长cDNA序列，并构建其正、反义真核表达载体，通过脂质体法转染人胃癌细胞系SGC7901，观察Angl转染对细胞生物学行为及裸鼠体内致瘤性和血管生成的影响，初步探讨Angl在胃癌发生及血管生成中的作用，以便进一步利用其作为基因治疗的靶点。主要实验方法及结果包括： 1、由富含血管的人胎盘组织提取RNA，通过RT-PCR方法，扩增了Angl编码区全长的cDNA序列，经序列测定加以证实。 2、通过定向克隆方法，将目的基因按正反两个方向亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1-V5-His C, 构建了正、反义真核表达载pcDNA3.1-Angl+及pcDNA3.1-Angl-，其方向性由酶切鉴定证实。 3、pcDNA3.1-Angl+真核表达载体瞬时转染293细胞，通过MTT比色和细胞计数法，发现Angl瞬时转染上清对HUVEC有促进增殖作用；通过流式细胞仪PI/AnexinV双染色分析发现，Angl对血浆饥饿条件下HUVEC的凋亡有抑制作用。 4、使用脂质体介导的方法将正、反义重组载体及空载体分别转染人胃 第四军医大学硕士学位论文癌f田胞系SGC7901；经G418筛选，相应得到牙定转染细胞株7Angl＋、7Angl－及 790lP。半定量PCR及Western Blot结果证买：反义核酸转染的 7Angl－细胞中 Augl的 mRNA及蛋白表达水平均显著下调，而空载体和正义转染组无明显变化。 5、MTT比色试验绘制细胞生长曲线显示三组转染细胞的生长速度无明显变化。转染细胞在先镜及电镜下形态均无明显改变，流式细胞仪分析结果显示转染细胞的细胞周期分布均无明显改变。 6、裸鼠体内成瘤试验结果表明，7Angl－组肿瘤生长显著减慢，三纽细胞接种裸鼠 30天后，瘤体的平均重量（M i SD，mg）分别为 293刀0 i 95．54（7Angl－组）；652＊7 i 132＊7（7Angl＋组）和 624＊of 77．78（790lP组）。统计学处理表明，反义核酸转染细胞的成瘤性显著低于正义转染细胞及空载体转染细胞巾＜0＊1)。 7、裸鼠瘤体组织血管特异性分子VIH N子染色发现，7Aug卜组微血管密度（MVD）数目（6．00．73）显著＊、于（P＜．of）790lP 组（8．44．33）及7AnRI＋组侣．78 if．33)，说明反义核酸转染组肿瘤的血管生成显著减少。 以上实验表明：灿钉与人胃癌细胞盼凹901致瘤作用有关，可能通过促进肿瘤组织血管生成而加速肿瘤生长；利用反义核酸技术可部分逆转这种作用。以上结果对于进一步利用抗血管生成疗法来治疗胃癌具有潜在意义。