肿瘤的发生是一个多基因、多阶段逐步演进的过程，是一种癌基因的激活和抑癌基因失活的基因病。但肿瘤细胞的形成及其恶性表型的维持并不是由单个基因决定的，它涉及多个基因及其相互间的调控。随着人类基因组(测序)计划的完成以及分子生物学相关学科的迅猛发展，人们对基因序列的了解越来越深入，但对于各个基因所担负的确切功能尚不清楚，进一步探讨众多基因是如何组织起来、如何随着发育进行调控及受微环境因素的影响而在特定的时空域里展开其表达谱等问题，将是科研工作者由结构基因组时代迈入功能基因组时代所面临的重要课题。f］、、大学2002年硕士论文 肺癌组织 P33 INGI的表达及其与 P53蛋白的关系 INGI（inhibitor of growthl）基因是新近发现的候选抑癌基因，参与细胞生长的负性调节，在乳腺癌、胃癌、淋巴瘤等多种肿瘤中表达减低。体外实验发现其表达产物 P33 I’NGI与 P53蛋白之间在抑癌功能上有相互依赖作用。但肺癌组织中 ING基因的表达情况国内外尚未见报道。P53是涉及细胞增殖＼细胞凋亡和细胞衰老调控的核心元件，被公认为与人类肿瘤的相关性最高。有文献报道［‘］，p53突变是肺癌发生的早期分于事件，对肺癌早期预报有重要参考价值。但还有约50％的肺癌没有检测出p53突变。大量研究发现P53蛋白抑癌功能的发挥受其它基因或基因产物调控，围绕P53的复杂的调控网络尚不明确，揭示其中的某一环节将会对深入认识肺癌发生的机制有所稗益。本研究采用Westernblot方法首次检测P33 INGI在肺癌组织和癌周围组织中的表达情况并对其与P53蛋白的关系作出初步分析。方法：1．标本收集：手术后新鲜标本来源于同一患者的肺癌组织、距癌肿3cm组织及距癌肿scm组织，取材后立即冻存于液氮中，后置丑0 oC低温冰箱保存。2．肺组织蛋白提取：快速剪取0．ig～0．sg肺组织， 3 郑州大学 2002年硕士论文 肺癌组织 P33 ING的表达及其与 P53蛋白的关系 0℃PB S充分洗涤，于冰预冷的悬浮缓冲液中匀浆后 尽快加入等体积的 2 X SDS．凝胶加样缓冲液，然后将 样品置于沸水浴中加热 10min，超声破断 DNA，在 室温下 10 000rpm将样品离心 10min，上清液移于 另一Eppendorf管中，弃去沉淀物。所得上清液即为 蛋白质提取物，上0 aC保存。用紫外可见分光光度仪检 测上清中蛋白质提取物的＊D值，计算使用Western blot免疫印迹法测靶蛋白所‘需要的样品量。 3．蛋白分离与转移：12％聚丙烯酚胺凝胶电泳 瞩DSPAGE）分离蛋白后，将凝胶上的蛋白转移到硝 酸纤维素膜上。 4．杂交与显色：转移上蛋白的硝酸纤维素膜经封闭 液封闭后，分别与一抗、二抗杂交，最后用 3，3’－h氨基联苯胺（DAB）显色。 5．照相：应用 Bio Imaging System成像了并用 GeneToolS软件分析各蛋白条带，保存结果进行统 计分析。 6．统计学处理：所获数据采用统计分析系统＊tatistical analysis system）SAS6．12软月处理。 结果： 4，」郑州大学2002年硕士论文 肺癌组织P33＊口1的表达及其与P53蛋白的关系＠一 1．肺组织标本收集结果：本研究共收集肺癌组织（A 组）31例；足癌肿 3 cm组织旧组）ZI例；B癌肿 5 cm 组织K组）12例。A组中有鳞癌 22例，腺癌 7例，大 细胞肺癌1例，小细胞肺癌1例。A组中有ZI例可以与 B组配对（AE），此配对中又有12例可以与C组配对 （A－B．C）。 2．P53蛋白表达结果：AE配对中有57．l0门厘）的 癌组织P53蛋白表达增高，异常检出率与文献报道一致 （50％～60％）。A－B－C配对中，A组和 B组的 P53蛋臼 表达水平显著高于C 组，差异有统计学意义 （P＜0．05），但A组与B组之间P53蛋白表达水平差异 无统计学意义（P功．0引。 3．P33 INGI 蛋白表达结果：A8配对中有 66．7％ （ 4a 1）的癌组织 P3 3 ING蛋白表达减低。在 A、B。 C三组及 AE（配对中，A组与 C组比较，其 P33 INGI 蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义（P＜0．05）；i 但A组与B组、B组与C组之间差异无统计学意义 （＞0．05）。 4．P53蛋白与P33 INGI蛋白表达结果的比较分祈：P53 表达增高的患者中有 66．70旧八）的 P33 INGI表达减1 低，P53表达没有增高的患者中有55．60厂乃）的P33S；8 郑州大学2002年硕士论文 肺癌组织P33 IN口1的表达及其与P53蛋白的关系 ING表达减低。经相关分析及一致性检验没有发现两者 之间存在相关性（P＞o．0引。