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目的：血管紧张素转换酶抑制剂（Angiotensin- converting enzyme inhibitors ACEI）已广泛应用于慢性心力衰竭、原发性高血压及心肌梗死的治疗。然而其副作用——咳嗽却在一定程度上限制了其应用。关于ACEI相关性咳嗽的发生机制尚未十分明确。为了探讨ACEI所致咳嗽副反应的遗传易感性，应用多聚酶链式反应（Polymerase chain reaction，PCR）及单链构像多态性分析（Single-strand conformation polymorphism，SSCP）检测ACE基因插入/缺失（Insertion/deletion I/D）多态性与缓激肽B2受体基因启动子区-58T/C多态性，并连锁分析上述基因多态性与ACEI所致咳嗽的关系。方法：选择2001年6月至2002年12月住院并接受开搏通（卡托普利）治疗的高血压、心肌梗死及慢性稳定心衰患者145例。根据服药两周后有无咳嗽副反应的发生分为咳嗽组与无咳嗽组。所有患者均为汉族，无血缘关系，无近期烟史及呼吸道感染史，无慢性支气管炎及支气管哮喘等呼吸道疾病史。DNA提取：抽取外周静脉血4ml，0.2%枸橼酸钠抗凝，0.83%氯化铵分离提取白细胞。采用UNIQ-10柱式DNA抽提试剂盒提取基因组DNA（药盒购自上海生工），提取<WP=4>的基因组DNA置于-20℃冰箱保存，待测。ACE基因I/D多态性检测：用PCR法扩增ACE基因第16内含子目的片段，引物序列为：正向： 5’—CTGCAGACCACTCCCATCCTTTCT—3’，反向： 5’—GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT—3’。总反应体系50 ul (10×buffer 5ul, dNTP 200 umol/L,引物 0.4 umol/L，基因组DNA 0.1 ug, Taq酶2.5U, Mgcl2 1.5 mmol/L)。PCR扩增循环条件：94℃ 预变性2 min， 94℃ 变性 50 sec，55℃ 退火1 min，72℃ 延伸 1 min，共35个循环，最后一个循环72℃延伸5分钟。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，0.12%溴化乙锭染色后紫外灯下观察结果。缓激肽B2受体基因-58T/C多态性检测：首先PCR扩增目的基因片段，引物序列为：正向： 5’—GCAGAGCTCAGCTGGAGGAG—3’，反向： 5’—CCTCCTCGGAGCCCAGAAG—3’。总反应体系50 ul (10×buffer 5 ul, dNTP 200 umol/L,引物 0.4 umol/L，基因组DNA 0.1 ug, Taq酶 2.5U, Mgcl2 1.5 mmol/L)。循环条件如下: 94℃ 预变性 3分钟，94℃ 变性 1分钟，60℃ 退火 45秒，72℃ 延伸 1分钟，共35个循环,最后一个循环72℃延伸5分钟。PCR产物首先以1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定结果，而后行SSCP分析。即先将PCR产物5ul与等体积甲酰胺变性液混匀,于85℃-95℃沸水浴10分钟,迅速置于冰浴中。然后走20%聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳缓冲液为2×TBE，4℃电泳20小时。硝酸银染色鉴定结果，最后克隆测序,明确突变为腺嘌呤（Cytosine C）或胸腺嘧啶（Thymidine T）。<WP=5>应用SSPS10.0软件分析系统进行统计分析。结果：所有患者均按设计完成实验，其中27.59%(40/145)的患者发生了ACEI相关的咳嗽，而且咳嗽发生组中大部分患者为女性（26/40），男女之比约为1：2。1.ACE基因PCR扩增结果：PCR扩增产物呈两种带型：长度为490bp者，为插入型（I型）；长度为190bp者，则为缺失型（D型）。群体中可表现为三种基因型即：缺失纯合子型（DD型），仅有190bp的电泳条带；插入纯合子型（II型），仅有490bp的带型； 插入/缺失杂合子型（I/D型），有490bp和190bp两种带型。2．缓激肽B2受体基因PCR-SSCP结果：PCR扩增结果于1.2%琼脂糖凝胶电泳下表现为122bp的电泳条带。经SSCP分析，聚丙烯酰胺凝胶电泳下表现为三种基因型，分别为：TT、TC和CC型。3. ACE基因I/D多态性基因型分布及基因频率比较：ACE基因型分布及基因频率符合hardy-weinberg平衡。咳嗽组中，II、ID、DD基因型分别为45.00%、35.00%、20.00%；而无咳嗽组中，上述基因型分别为33.33%、34.29%、32.38%。两组间比较无统计学差异（χ2=3.232, P>0.05），但咳嗽组的II基因型相对于无咳嗽组有增高趋势（45.00% vs 33.33%）。咳嗽组的I等位基因频率却明显高于无咳嗽组（χ2=4.135, P<0.05）。亚组分析显示：在女性患者中，咳嗽组中II基因型明显高于无咳嗽组（χ2=8.342, P<0.025）4.缓激肽B2受体基因-58T/C基因型分布及基因频率比较：基因型分布及基因频率符合hardy-weinberg平衡。咳嗽组中，TT、CT、CC基因型分别为30.00%、57.50%、<WP=6>12.50%；无咳嗽组中，上述基因型分别为22.86%、59.04%、18.10%。两组间无统计学差异（χ2=3.052, P>0.05）。咳嗽组的T等位基因频率却明显高于无咳嗽组（χ2=4.047, P<0.05）。 5.连锁分析ACE基因I/D多态性及缓激肽B2受体基因T/C多态性与咳嗽的关系：咳嗽组中同时具有ACE II与缓激肽B2受体TT基因型者比率明显高与无咳嗽组。（χ2=11.327, P<0.005），基因型为ACE II+缓激肽B2受体TT者，其发生ACEI相关性咳嗽的风险比（OR=13.574）明显高于单独具有ACE II基因型（OR=0.589）、缓激肽B2受体TT基因型（OR=0.250）及其他基因型组合者（OR=0.003）。结论：关于ACEI所致咳嗽的确切发病机制仍未十分明确。在中国汉族人群中，服用ACEI类药物后发生咳嗽副反应可能呈一定遗传易感性。同时具有ACE II基因型与缓激肽B2受体-58TT基因型者，其发生ACEI相关性咳嗽的风险远高于ACE I